Экология СПРАВОЧНИК

Среди мероприятий по снижению и предупреждению инфекционной заболеваемости ранняя и быстрая индикация бактериального и вирусного, загрязнения воды имеет особое значение. Своевременное обнаружение бактериального загрязнения воды является необходимым условием для правильной организации противоэпидемических и общеоздоровительных мероприятий. Достоверность и показательность результатов исследования в значительной степени определяются чувствительностью и совершенством методики, а также простотой, доступностью и быстротой выполнения анализа.

Далее

Одним из распространенных и простых косвенных санитарно-микробиологических показателей является общий уровень микробного загрязнения воды.В практике наиболее распространен учет группы микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре при определенной температуре и времени инкубации в аэробных и факультативно анаэробных условиях. Сравнимые данные можно получить только при строгом соблюдении всех параметров метода, которые оговаривают для каждого объекта, особенно при нормировании показателя.

Далее

По сравнению с оценкой общего уровня микробного загрязнения гораздо более достоверные сведения о возможности опасного в эпидемическом отношении загрязнения окружающей среды дает количественный учет санитарно-показательных (индикаторных) микроорганизмов.

Далее

Наиболее признанным и распространенным во всем мире санитарно-показательным микроорганизмом является кишечная палочка, открытая в 1885 г. Escherich. Масе (1888) впервые предложил использовать кишечную палочку в качестве показателя фекального загрязнения воды.

Далее

Энтерококки наряду с кишечной палочкой изучаются в качестве возможных показателей фекального загрязнения воды. Широкие исследования в этом плане развернулись за рубежом начиная с 50-х годов, когда были разработаны новые эффективные методы определения энтерококков с использованием сред с азидом натрия. В нашей стране изучение энтерококков в качестве санитарно-показательных микроорганизмов начато в 60-х годах, чему немало способствовала разработка для их выделения щелочно-полимиксиновой среды, состоящей из отечественных недефицитных ингредиентов (Г. П. Калина, 1966). Разностороннее изучение энтерококков как санитарно-показательных микроорганизмов привело к тому, что в стандартах ряда стран (Англия, США, Югославия), а также Международных (1973) и Унифицированных методах СЭВ (1975), и в ряде официальных документов санитарного законодательства СССР энтерококки признаны дополнительными показателями фекального загрязнения воды.

Далее

При определении санитарно-показательных клостри-дий особое внимание следует обратить на температуру инкубации. В летний период при 37°С на среде Вильсона— Блера вырастает до 90—99% черных колоний, образованных гнилостными анаэробными палочками и кокками, не являющимися показателями фекального загрязнения водоемов (Т. 3. Артемова, 1973). Совместный учет этих сапрофитных бактерий с кло.стридиями значительно искажает результаты, показатель теряет индикаторное значение при оценке качества воды водоемов и питьевой воды. Вполне возможно, что отрицательное отношение к клостридиям как санитарно-показательным организмам подкреплялось данными неточных методов исследования.

Далее

Присутствие в воде фагов, лизирующих кишечные бактерии, исследователи оценивали с нескольких точек зрения. Эпидемиологическое значение находок фагов соответствующих патогенных бактерий подтверждено рядом примеров. Некоторые авторы установили связь между обнаружением тифо-паратифозных, холерных, дизентерийных фагов с наличием в воде соответствующих возбудителей и с заболеваемостью этими кишечными инфекциями (Р. В. Чеботарева и др., 1947; Т. С. Фейгин, 1963; Е. Н. Миляева, 1969, и Др.). Выполнены многочисленные исследования по использованию реакции нарастания титра фага (В. Д. Тимаков. Д. М. Гольдфарб.

Далее

Все возрастающее значение рекреационного водопользования, особенно в курортных морских зонах, а также широкое строительство плавательных бассейнов ставит проблему предупреждения не только кишечных инфекций, но и заболеваний верхних дыхательных путей и кожных покровов при контакте во время купания с загрязненной водой. Fisch (1969) описал вспышки конъюк-тивитов и аденовирусных заболеваний, связанных с купанием в плавательных бассейнах. Из воды были выделены аденовирусы, стафилококки, зеленящие стрептококки, коринебактерии дифтерии, синегнойные палочки, патогенные грибы. Stevenson (1953) отмечал у купающихся высокий процент поражений носоглотки. Sewage, Lecierk (1966) пришли к выводу об инфицирующей роли воды плавательных бассейнов в распространении стафилококковых инфекций. Из данных литературы и наших исследований вытекает необходимость регламентации в воде, используемой для купания, не только уровня фекального загрязнения, но и загрязнения возбудителями инфекций верхних дыхательных путей. В качестве санитарно-пока-зательных микроорганизмов можно рекомендовать представителей кокковой микрофлоры, постоянно обитающих в верхних отделах дыхательных путей и обычно используемых как индикаторы возбудителей аэрогенных инфекций в воздухе.

Далее

Ускоренными методами называют такие, которые позволяют сократить время анализа по сравнению с «классическим» ходом исследования. В определении «классический» и «ускоренный» метод имеется известная условность. По мере разработки, тщательной проверки и сравнительной оценки ускоренные методы вводятся в ГОСТ и используются в практических лабораториях. Ускорение метода не должно наносить ущерба точности анализа и снижать санитарно-показательное значение выделяемой этим методом группы микроорганизмов.

Далее

Стандартный метод определения числа сапрофитных микроорганизмов за многие годы применения в практике санитарно-бактериологического анализа не претерпел существенных изменений. Это связано, вероятно, с тем, что этим методом определяют не какую-либо таксономическую единицу, а группу микроорганизмов, объединяемых едиными требованиями к условиям питания, температуре инкубации, близким по интенсивности развития при этих условиях. Сравнимые результаты могут быть получены только при строгом соблюдении всех условий метода — стандартная питательная среда, единая температура и сроки выращивания.

Далее

Метод определения общего числа микроорганизмов в воде путем их микроскопического подсчета (прямой метод) был впервые предложен Н. Г. Холодным (1929). Метод сводится к концентрированию бактерий, содержащихся в воде, посредством аппарата Кольквииа на мембанном фильтре. Из концентрата берут одну каплю воды, подсушивают ее на предметном стекле, окрашивают эритрозином и подсчитывают бактерии на определенной площади мазка под микроскопом с иммерсионной системой при помощи окулярного сетчатого микрометра. С. И. Кузнецов и Г. С. Карзинкин (1930) независимо от Н. Г. Холодного разработали свой метод микроскопического подсчета количества микроорганизмов. Концентрирование микроорганизмов производят путем выпаривания воды в вакууме при температуре 38—40°С. Из концентрата готовят препарат на предметном стекле и подсчитывают число бактерий па определенной площади при помощи окулярного сетчатого микрометра. JI. Н. Гурфейн (1930) применила метод, предложенный Б. Л.

Далее

С развитием лабораторной техники были сделаны попытки автоматизировать и объективно регистрировать подсчет общего числа микроорганизмов.Для учета микроорганизмов в камерах можно использовать электронные счетчики, работающие по принципу телевизионной трубки (электронный луч пробегает по камере с исследуемой жидкостью, число импульсов, которые возникают при задержке луча частицами, автоматически суммируется). Для определения числа частиц в струе жидкости можно использовать импакторы, осаждающие частицы определенных размеров на улавливающие пластинки, которые затем подвергают микроскопическому или фотометрическому исследованию; электростатические счетчики, дающие импульсы при ударе просасываемых частиц о заряженную металлическую нить; фотоэлектрические или электронные счетчики, отмечающие прохождение частиц благодаря рассеиванию или задержке пучка света или электронного потока (Г. Н. Чистович, 1969).

Далее

В 1956 г. С. И. Василов разработал объективный метод и фотоэлектрическую установку для автоматической регистрации интенсивности люминесценции в определенном объеме среды. Используя этот прибор, С. И. Василов с соавт. (1957) сделали попытку определить концентрацию бактериальных тел в культурах E. coli и стафилококка по интенсивности собственного свечения клеток в ультрафиолетовой и видимой части спектра. Применение методики к бактериальным взвесям различных видов, но одинаковой концентрации, позволило по максимальной интенсивности свечения отделить E. coli от патогенных представителей семейства Enterobacteriaceae (сальмонеллы паратифа А, шигеллы Флекснера), а также палочковидные формы бактерий от кокковых.

Далее

Число сапрофитных бактерий в питьевой водопроводной воде ежедневно контролируется в соответствии с ГОСТ 2874-73. Обычно в питьевой воде содержатся единичные клетки (не более нескольких десятков в 1 мл). По данным А. С. Разумова (1962), в хлорированной водопроводной воде число сапрофитных бактерий составляет лишь 0,1—0,001% от всего ее микронаселения, определяемого прямым микроскопическим методом, т. е. основная часть микрофлоры водопроводной воды состоит из микроорганизмов, не учитываемых на питательном агаре и не изученных ни в количественном, ни в качественном отношении.

Далее

Современная микробиологическая наука располагает достаточно обширным набором методе« и приемов разде ления живых и мертвых микроорганизмов. В основу этих методов положены следующие критерии жизнеспособности бактерий: 1) способность к размножению и образованию микроколоиий на плотных средах; 2) фермента • тинная активность клеток; 3) изменение свойств клетки (проницаемости клеточной стенки, показателя преломления, восприятия того или иного красителя и т. д.). Однако задачу нельзя считать окончательно решенной даже в отношении суспензии чистой культуры микроорганизмов. Совершенно не разработана эта задача в отношении микроорганизмов природной воды, где исследователь имеет дело с самым разнообразным микробным биоценозом, до сих пор еще в полной мере не изученным. Оценка уже имеющихся методов разделения живых и мертвых бактерий позволяет выбрать для дальнейшей разработки приемы, наиболее подходящие для исследования микрофлоры воды.

Далее

Совершенствование методов определения БГКП как основного, принятого во всех странах, косвенного показателя эпидемической безопасности воды является наиболее актуальной задачей. Эти методы, постоянно используемые практическими лабораториями, составляют основу действенного контроля качества воды различного вида водопользования. Ускорение и упрощение анализа, выполняемого ежедневно по стране тысячи и десятки тысяч раз, составят огромную экономию времени, сред, реактивов, посуды и т. д., а увеличение точности и надежности результатов повысит качество контроля за состоянием питьевой воды н воды других водных объектов.

Далее

Значительные возможности для ускорения бактериологического исследования воды появились после разработки К. К. Барсовым (1932) метода мембранных фильтров. Достоинством метода мембранных фильтров является возможность концентрирования бактерий из значительных объемов воды, что имеет большое значение при анализе чистых вод и, в частности, водопроводной воды.

Далее

Выбор объема воды для анализа. Объем воды для посева выбирают в зависимости от предполагаемого ее качества с таким расчетом, чтобы на фильтрах получить не более 50—70 изолированных колоний, в том числе не более 30 колоний БГКП.

Далее

В практике санитарно-гигиенических исследований объектов окружающей среды (вода, почва, воздух, пищевые продукты и др.) нередко возникает необходи-м ость проведения знйлизэ на месте отбор з. проб, В М 2. КС и ■ малыш короткие сроки.

Далее

Для приготовления питательных подкладок можно использовать асбестовые фильтрующие пластинки типа Зейтца («Ф») размером 300 мм, ГОСТ 480-1 или обычную листовую фильтровальную бумагу, сложенную в 8—10 раз. Из указанного материала вырезают диски диаметром 40—45 мм, несколько большим, чем диаметр мембранного фильтра. Диски стерилизуют в сушильном шкафу при температуре 100—120"С. Среду для пропитки подкладок готовят следующего состава: на 100 мл питательного бульона Хоттингера добавляют лактозы 2 г, агар-агара 0,1 г, 0,1% спиртового раствора розоловой кислоты 0,2 мл, расплавляют при нагревании и стерилизуют при 112°С 12 мин. После охлаждения до 70—60°С асептично добавляют 10 мл 2% водного раствора ТТХ.

Далее

На основании этих разработок налажен промышленный выпуск индикаторных бумажек для определения кишечных палочек в молоке, молочных продуктах и смывах с оборудования Рижским заводом «Реагент». Индикаторные бумажки в соответствии с инструкцией, разработанной ВНИИ молочной промышленности, рекомендованы к использованию для санитарно-гигиенического контроля оборудования и готовой продукции, не имеющей нормативных показателей.

Далее

Определенные трудности для быстрого и эффективного выделения энтерококков из воды связаны с малой энергией их роста на обычных питательных средах. Поэтому в среды, используемые для обнаружения энтерококков в воде, обязательно добавляют углеводы (глюкоза, лактоза, мальтоза), дрожжевые препараты (экстракты, лизаты, диализаты, автолизаты). В качестве питательной основы используют, помимо мясного питательного агара, мясные триптические перевары, экстракты из сердца, мозгов, протеозные и триптозные пептоны и пептиды. Небольшое содержание энтерококков в воде по сравнению с кишечными палочками и другой сапрофитной микрофлорой требует применения высокоэлективных сред, в которых полностью подавлялся бы рост грамотрицательной микрофлоры, а также посторонней грамположительной — микрококков, стафилококков, споровых бактерий, сарцин. В ряде случаев требуется подавить рост других стрептококков, например, Sir. iac-tis, особенно при исследовании пищевых продуктов.

Далее

Санитарно-показательные клостридии, к которым относится преимущественно CI. perfringens, для своего развития не требуют строго анаэробных условий. Вполне достаточно поместить посевы в толщу плотной питательной среды или в жидкие среды, т. е. обойтись без специальной аппаратуры и сложных манипуляций. Это обстоятельство является основой простых методов определения санитарно-показательных клостридий в воде.

Далее

Метод определения фагов кишечных палочек прост, не требует специального оборудования и дефицитных реактивов, ответ получается через 18—24 ч.Перед определением пробу воды в объеме 30 мл освобождают от микрофлоры. Из существующих методов (центрифугирование, фильтрование через мембранные фильтры № 2 или 3, обработка хлороформом) последний прием является наиболее простым и вместе с тем щадящим в отношении фагов. На каждый миллилитр пробы добавляют 1 каплю хлороформа, энергично встряхивают и отстаивают в течение 30 мин. Хлороформ оседает на дно, а фаги остаются в жидкости над хлороформом.

Далее

Как правило, при исследовании воды на санитарно-показательные микроорганизмы бактериологи выполняют групповую дифференциацию, однако определение родов и видов имеет значение при расшифровке происхождения и характера загрязнений, поскольку различные виды санитарно-показательных микроорганизмов имеют неодинаковое индикаторное значение.

Далее

Определение сахаролитической активности. Характер ферментации углеводов имеет большое значение в ряду таксономических признаков. Сбраживание глюкозы или лактозы с образованием кислоты и газа является основным дифференциальным свойством санитарно-показательных БГКП. Разложение углеводов начинается с развития популяции и интенсивно протекает в фазе логарифмического роста. Поэтому уже через 2—3 ч после начала инкубации в среду начинают поступать продукты распада. При использовании жидких сред газообразные продукты сначала растворяются в среде и только после полного насыщения начинают выделяться в виде пены на поверхности или скапливаются в бродильных трубках. Классические методы определения сахаролитической активности занимают 18—24 ч, а в отношении лактозы — 24—48 ч. В ускоренных методах используют различные способы улавливания газообразных продуктов с момента начала их выделения.

Далее

Количественное определение в воде не только общего числа энтерококков, но и отдельных видов имеет значение при оценке качества воды, поскольку санитарнопоказательное значение каждого из них различно (Г. Г. Калина, 1973). Обнаружение Str. faecalis подтверждает безусловно недавнее хозяйственно-бытовое загрязнение. По соотношению различных видов иногда можно составить представление о происхождении фекального загрязнения. В ряде случаев необходимо быстро и точно определить как всю группу энтерококков, так и соотношение количества отдельных видов.

Далее

Для получения единообразных результатов рекомендуется использовать сухие питательные среды. Их приготовление регламентируется инструкциями, приложенными к средам. В случае отсутствия сухого препарата среды готовят по следующим прописям.

Далее

Среда Хеннея и Нортона. Пептона 10 г, хлорида натрия 5 г, двуосновного фосфата калия 5 г, фосфата калия одноосновного 2 г, глюкозы 5 г, дрожжевого экстракта 3 г, азида натрия 0,25 г, 1,6% спиртового раствора бром-крезола пурпурного 2 мл, дистиллированной воды 1000 мл, pH 6,8. Разливают по 5 мл в пробирки и стерилизуют 15 мин при 112°С. Для посевов 10—50 мл воды готовят среду двойной концентрации и разливают по 10 и 50 мл.

Далее

Солевой бульон (элективная среда для накопления стафилококка). К питательному бульону прибавляют 9,5% хлорида натрия, растворяют при кипячении, разливают в пробирки и стерилизуют 20 мин при 120°С.Для приготовления желточной эмульсин свежее куриное яйцо обеззараживают, асептично отделяют желток, смешивают в течение 5 мин в 50 мл изотонического раствора с помощью стеклянных бус.

Далее