Метод определения общего числа микроорганизмов в воде путем их микроскопического подсчета (прямой метод) был впервые предложен Н. Г. Холодным (1929). Метод сводится к концентрированию бактерий, содержащихся в воде, посредством аппарата Кольквииа на мембанном фильтре. Из концентрата берут одну каплю воды, подсушивают ее на предметном стекле, окрашивают эритрозином и подсчитывают бактерии на определенной площади мазка под микроскопом с иммерсионной системой при помощи окулярного сетчатого микрометра. С. И. Кузнецов и Г. С. Карзинкин (1930) независимо от Н. Г. Холодного разработали свой метод микроскопического подсчета количества микроорганизмов. Концентрирование микроорганизмов производят путем выпаривания воды в вакууме при температуре 38—40°С. Из концентрата готовят препарат на предметном стекле и подсчитывают число бактерий па определенной площади при помощи окулярного сетчатого микрометра. JI. Н. Гурфейн (1930) применила метод, предложенный Б. Л.[ ...]
Метод Разумова. Принципиально новый подход, предложенный А. С. Разумовым (1932),— концентрирование, окрашивание и подсчет микроорганизмов непосредственно на мембранном фильтре — исключил все названные недостатки ранее предложенных методов. Метод А. С. Разумова нашел признание как в пашей стране, так и за рубежом и до настоящего времени широко используется для определения общего числа микроорганизмов в воде водоемов. Метод называют также «прямым», или «методом прямого микроскопического счета бактерий».[ ...]
Сущность метода заключается в концентрировании на мембранном фильтре микроорганизмов из воды, окрашивании их карболовым эритрозином непосредственно на фильтре и подсчитывании под микроскопом с помощью окулярной сетки. Анализ занимает около часа.[ ...]
Порядок отбора, хранения и транспортирования проб воды такой же, как и для прочих санитарно-микробиологических исследований, однако в случаях крайней необходимости пробы для определения общей численности микроорганизмов можно хранить более длительно, зафиксировав формалином (1 мл на 50 мл исследуемой воды). Отбирать пробу можно в нестерильную, но чисто в ы м ы ту ю по су д у.[ ...]
Для концентрирования микроорганизмов применяют мембранные фильтры № 1 или № 2. На края фильтров наносят тушыо порядковые номера. После высыхания надписей фильтры кипятят в дистиллированной воде, сменяя се 2—3 раза обычным способом, после чего хранят в банке с притертой пробкой в 40% спирте или 4% формалине, чтобы предотвратить развитие микроорганизмов.[ ...]
Фильтры с осевшими на них микроорганизмами высушивают на фильтровальной бумаге на воздухе, в термостате или в слабо нагретом сушильном шкафу. В сухом виде фильтры можно доставить в лабораторию или немедленно окрасить раствором карболового эритрозина (5 г краски на 100 мл 5% водного раствора фенола).[ ...]
Препарат изучают под микроскопом с иммерсионным объективом (90Х) при окуляре с сетчатым микрометром (10Х). Подсчитывают не менее 20 нолей зрения в разных частях фильтра на общей площади 20 000 мкм2.[ ...]
При различном увеличении микроскопа меняется субъективное восприятие бактерий и частиц даже у одного исследователя. Поэтому для получения сравнимых результатов целесообразно использовать одну и ту же микроскопическую технику.[ ...]
Средняя ошибка метода, определяемая разницей между несколькими определениями одной пробы, колеблется по данным различных исследователей и составляет у Н. Г. Холодного 4,2%, у Н. Д. Иерусалимского 6,15%, у С. И. Кузнецова и Н. С. Карповой (1966) 10%, у О. Л1. Кожовой (1964) 2,3%. М. И. Новожилова (1959) считает, что средняя ошибка прямого метода зависит от числа подсчитываемых полей зрения и колеблется в пределах 2,8—10%. По ее данным, для пресных водоемов достаточно подсчитывать бактерии в 10—20 полях зрения. В работах Л. Е. Корш (1970) средняя ошибка метода составила 3,4% и находилась в доверительных границах 2,04—4,64% с надежностью 0,95.[ ...]
Вернуться к оглавлению