В 1956 г. С. И. Василов разработал объективный метод и фотоэлектрическую установку для автоматической регистрации интенсивности люминесценции в определенном объеме среды. Используя этот прибор, С. И. Василов с соавт. (1957) сделали попытку определить концентрацию бактериальных тел в культурах E. coli и стафилококка по интенсивности собственного свечения клеток в ультрафиолетовой и видимой части спектра. Применение методики к бактериальным взвесям различных видов, но одинаковой концентрации, позволило по максимальной интенсивности свечения отделить E. coli от патогенных представителей семейства Enterobacteriaceae (сальмонеллы паратифа А, шигеллы Флекснера), а также палочковидные формы бактерий от кокковых.[ ...]
Отмечена невысокая чувствительность метода (0,5 млрд. микробных тел в 1 мкл) (С. И. Василов, Л. Н. Родионова, 1958).[ ...]
Дальнейшее развитие метод флуорохромирования в объеме пробы нашел в трудах Л. А. Киянской с соавт. (1966). В Ленинградском филиале ВНИИ медицинского приборостроения при нашем консультативном участии разработан метод и на его основе прибор для определения общей микробной (белковой) загрязненности воды с применением флуорохромирования.[ ...]
Еще в начале 50-х годов появился ряд публикаций, описывающих применение различных сканирующих устройств для автоматического счета или дифференциации клеток, окрашенных флуорохромами (Mellors, Silver, 1951; Mellors е. а., 1952; Loeser, Berkley, 1954).[ ...]
В 1955 г. Ehrlich с соавт. использовали электронное сканирующее устройство для количественного определения бактериальной популяции в чистых культурах в питательном бульоне. Бактериальный мазок готовили количественно, окрашивали флуорохромом корифосфином и исследовали под люминесцентным микроскопом, включающим фотометрическую систему для измерения интенсивности флуоресценции, излучаемой микробами данного поля зрения. Контроль вели визуальным прямым микроскопическим подсчетом. Получена линейная зависимость между интенсивностью свечения и количеством бактерий, связь выражена больше для более крупных организмов. Необходимая для регистрации интенсивность свечения достигалась содержанием в поле зрения от 2 до 10 тыс. бактериальных клеток.[ ...]
Поскольку концентрирование бактерий на мембранных фильтрах до значительных количеств не представляет трудности, то возможно использование этого принципа для учета общего микробного загрязнения воды с достаточной точностью. Метод подсчета флуорохромированных бактерий на мембранных фильтрах представляется более перспективным, чем исследование в объеме пробы, так как не имеет основных недостатков последнего, а именно свечения фона воды и свечения красителя в растворе.[ ...]
Люминесцентно-микроскопический метод с концентрацией бактерий на мембранных фильтрах (по Т. 3. Артемовой и Л. Е. Корш, 1974). Метод флуорохромирования сконцентрированных из воды на мембранных фильтрах бактерии с дальнейшим их люминесцентно-микроскопическим подсчетом разработан в связи с потребностями практики в экспрессном определении общей микробной загрязненности в од ы.[ ...]
Наилучшие результаты получены при применении красителя коричневого основного, ранее неизвестного в качестве гасителя люминесценции. Коричневый основной дает черно-коричневый фон при люминесцентной микроскопии, устойчив к действию ультрафиолетовых лучей, хорошо связывается с фильтром, равномерно его окрашивает, не разрушает материал фильтра. Гасящие свойства не распространяются на флуорохромируемые объекты. Разработанный способ гашения люминесценции мембранных фильтров позволяет обрабатывать фильтры заранее и длительно их хранить в темноте (Т. 3. Артемова, Л. Е. Корш, 1973).[ ...]
Вернуться к оглавлению