Определение сахаролитической активности. Характер ферментации углеводов имеет большое значение в ряду таксономических признаков. Сбраживание глюкозы или лактозы с образованием кислоты и газа является основным дифференциальным свойством санитарно-показательных БГКП. Разложение углеводов начинается с развития популяции и интенсивно протекает в фазе логарифмического роста. Поэтому уже через 2—3 ч после начала инкубации в среду начинают поступать продукты распада. При использовании жидких сред газообразные продукты сначала растворяются в среде и только после полного насыщения начинают выделяться в виде пены на поверхности или скапливаются в бродильных трубках. Классические методы определения сахаролитической активности занимают 18—24 ч, а в отношении лактозы — 24—48 ч. В ускоренных методах используют различные способы улавливания газообразных продуктов с момента начала их выделения.[ ...]
Метод ГОСТ 18963—73, основанный на полужидких средах. Полужидкие среды существенно уменьшают эффект растворения газа. Газообразные продукты, минуя фазу растворения, сразу образуют пузырьки, хорошо видные уже через 4—5 ч по уколу, а через 5—6 ч можно учитывать окончательный результат. Исключение составляют штаммы с ослабленной ферментативной активностью.[ ...]
Температура инкубации 41—43°С еще более ускоряет процесс. При учете результатов через 18—24 ч газ, как правило, улетучивается. О газообразовании можно судить лишь по оставленным пузырьками затемнениям среды.[ ...]
В опытах почасового наблюдения за развитием процесса ферментации в полужидких средах было установлено, что ферментация лактозы запаздывает по сравнению с глюкозой на 1—2 ч.[ ...]
Образование кислоты предшествует появлению видимых газообразных продуктов и может быть зафиксировано в еще более ранние сроки. Поэтому ГОСТ 18963-73 рекомендует учет результата через 5—6 ч после посева (в первые сутки). Пробирки, где отмечено образование только кислоты, следует инкубировать до 18—24 ч.[ ...]
Г. П. Калина (1976) разработал экспресс-метод для определения скрытого газообразования в жидких углеводных средах. Для этого в согретую в термостате среду через 2—3—6 ч после посева погружают нагретую докрасна петлю. Растворенный в среде газ бурно выделяется в виде пузырьков, образуя пену на поверхности среды. Через 16—18 ч освобождение растворенного газа, как правило, прекращается и описываемый феномен не воспроизводится.[ ...]
Метод С. А. Блинкина (1963). Метод дает возможность через 3—4 ч определять сахаролитическую активность кишечных бактерии и одновременно индолооб-разование. Для посева используют специальные пробирки с плоским дном. В каждую пробирку помещают 2 плотные среды с углеводами в виде скошенного агара и жидкую среду для определения индолообразования. Посев культуры производят концентрированно на малой поверхности плотных сред (по типу гигантской колонии). Помимо сокращения числа пробирок в 3 раза, этот способ сочетания плотных и жидкой среды способствует более длительному сохранению сред, предотвращает их высыхание. Кроме того, при использовании в качестве жидкого компонента среды Гисса с углеводом очень быстро выявляется газ в виде пены как на поверхности среды, так и позади скошенного столбика. Результат можно получить раньше, чем с помощью поплавков или в полужидких средах. Комбинация трех сред в одной пробирке способствует быстрому, в течение 3—4 ч, выявлению индола.[ ...]
М и кро метод по А. Л. Сироко (1955). В основу метода положен массивный засев культуры в микропробирку с полужидкими средами, с углеводом и индикатором Андреде. Через 6—7 ч получают ясную картину биохимических свойств изучаемых штаммов: изменение цвета среды в красный при кислотообразовании и пузырьки газа по уколу или разрывы в толще среды при газообразовании.[ ...]
Микрометод определения сахаролитических свойств по М. И. Фельдману в пастеровских пипетках и капельные методы также основаны на массивном посеве культуры в малые объемы сред с углеводами.[ ...]
М и к р о м е т о д М. А. Хейфеца (1950). Для определения биохимических свойств применяется специальная камера с углублениями, в которые вносят среды для испытания соответствующих тестов (сахаролитические свойства, образование индола и сероводорода). Среды заготавливают в капельницах впрок. Для улавливания газа поверхность среды закрывают бусинкой, под которой скапливается газ. Можно пользоваться полужидкими средами с индикаторами. После посева камеру помещают в пробирку, закрывают пробкой и инкубируют при 37°С. Кислотообразование отмечают через 2—3 ч, газообразование и индолообразование — через 3—5 ч. Индол определяют по Легаль — Вейлю: в углубление, в которое налит бульон, вносят одну петлю 15% раствора нитропрус-сида натрия, одну петлю 20% раствора едкого натра н очень небольшое количество (часть капли) крепкой уксусной кислоты. Появление зеленой окраски указывает на положительную реакцию.[ ...]
Вернуться к оглавлению