Современная микробиологическая наука располагает достаточно обширным набором методе« и приемов разде ления живых и мертвых микроорганизмов. В основу этих методов положены следующие критерии жизнеспособности бактерий: 1) способность к размножению и образованию микроколоиий на плотных средах; 2) фермента • тинная активность клеток; 3) изменение свойств клетки (проницаемости клеточной стенки, показателя преломления, восприятия того или иного красителя и т. д.). Однако задачу нельзя считать окончательно решенной даже в отношении суспензии чистой культуры микроорганизмов. Совершенно не разработана эта задача в отношении микроорганизмов природной воды, где исследователь имеет дело с самым разнообразным микробным биоценозом, до сих пор еще в полной мере не изученным. Оценка уже имеющихся методов разделения живых и мертвых бактерий позволяет выбрать для дальнейшей разработки приемы, наиболее подходящие для исследования микрофлоры воды.[ ...]
Широко распространены и общеприняты культуральные методы, основанные на способности живых микроорганизмов расти и размножаться при определенных условиях. Однако качество сред п условия культивирования не обеспечивают всем живым клеткам, даже в пределах ОТ НОЙ фпчттл0П1 !есг:0!Г группы, условия для ричла И размножения.[ ...]
М. А. Вакараш с соавт. (1974) применили культурально-микроскопический метод для быстрой оценки качества питательных сред. Метод оказался в 2—3 раза чувствительнее, чем чашечный, а для его выполнения требуется всего 3 ч.[ ...]
Однако если эти методы и дают представление о количестве живых бактерий в чистой культуре, то они совершенно непригодны для установления числа живых микроорганизмов в природной воде, так как никакая питательная среда и режим инкубации не могут быть универсальными для выращивания всех водных микроорганизмов. Установлено, что на питательном агаре вырастает не более 0,1—0,01 % от общего числа микроорганизмов, которые обнаруживают в природных водах микроскопическими приемами (А. С. Разумов, Л. Е. Корш, 1960; Mac Lead, 1965, и др.).[ ...]
Среди других оригинальных методов, не связанных с выращиванием микроорганизмов на средах, можно назвать определение жизнеспособности бактерий в электрическом поле с помощью электрофореза (А. И. Мирошни-ков и др., авт. свид. СССР № 372261).[ ...]
Новое, еще мало изученное направление предложил Levin (1963). Метод сводится к определению жизнеспособности клеток бактерий по их свойству разлагать радиоактивный субстрат (формиат натрия, глюкоза и др.).[ ...]
Наиболее простыми и доступными методами разделения живых и мертвых клеток являются различные варианты их дифференциальной окраски красителями с последующим микроскопированием. Для окрашивания живых клеток, как правило, применяли основные красители, например метиленовый синий, толуидиновый голубой, основываясь на базофилии растущих клеток. Мертвые клетки приобретают большее сродство к кислым красителям (конгорот, эозин), они оксифильны.[ ...]
М. А. Пешков (1955), исходя из наблюдений, что при отмирании бактерий в первую очередь разрушается ядер-ное вещество, предложил способ дифференциации живых и мертвых клеток, основанный на этом свойстве. Мазки с бактериями окрашивают первоначально краской Гимзы, затем светлым зеленым (лихт-грюн). Клетки, имеющие ядерное вещество, окрашиваются в фиолетовый цвет, а клетки, лишенные ядерного вещества, приобретают зеленую окраску. М. Ф. Лазарева (1953) впервые применила этот метод для раздельного учета живых и мертвых клеток в пробах воды, а также в иле.[ ...]
Вернуться к оглавлению