Санитарно-показательные клостридии, к которым относится преимущественно CI. perfringens, для своего развития не требуют строго анаэробных условий. Вполне достаточно поместить посевы в толщу плотной питательной среды или в жидкие среды, т. е. обойтись без специальной аппаратуры и сложных манипуляций. Это обстоятельство является основой простых методов определения санитарно-показательных клостридий в воде.[ ...]
Ранний визуальный учет начинающих развиваться колоний клостридий удобно вести по редукции сульфита и восстановлению железа, что приводит к почернению среды вокруг колонии, хорошо заметному невооруженным глазом. Плотные железо-сульфитные среды являются оптимальными для быстрого количественного учета клостридий в воде.[ ...]
Проведенное нами сравнение нескольких модификаций железо-сульфитных сред с разными соотношениями сульфита натрия, с использованием разных соединений железа (железо-аммиачные квасцы, хлорид железа, сульфат железа закисного) позволило рекомендовать сульфит натрия в концентрации 1 % и сульфат железа закисного.[ ...]
Добавление в среду антибиотиков (неомицин и поли-миксин) задерживает рост посторонней микрофлоры, снимает ее антагонистическое влияние на развитие клостридий, что также ускоряет анализ, повышает точность учета (Г. И. Сидоренко, Ю. П. Пивоваров, 1968).[ ...]
При разработке ускоренного метода определения клостридий использован метод прямого посева в плотную среду или мембранных фильтров (при необходимости концентрирования воды). Способ Graziadei — Celoria (1957), описанный в Унифицированных методах СЭВ (1975), с заливкои мембранных фильтров железо-суль-фитной средой в чашках при испытании не дал нам вполне точных результатов. Т. 3. Артемова предложила простой прием — помещать мембранный фильтр с концентрированными на нем бактериями в пробирку с высоким столбиком предварительно расплавленной среды, а затем быстро охлаждать под струей холодной воды. Этот прием способствует созданию анаэробных, наиболее благоприятных, условий для развития клостридий. Подсчет черных колоний на фоне белого фильтра значительно облегчается.[ ...]
На основании перечисленных приемов ускорения анализа разработан простой и быстрый метод определения в воде санитарно-показательных клостридий с использованием сульфит-полимиксин-неомициновой среды (СПН) (Г. И. Сидоренко, Ю. П. Пивоваров, 1968) и температуры инкубации 44—45°С. Дальнейшей идентификации выросших колоний не требуется. Метод одноэтапный. Время анализа 10—12 ч.[ ...]
Другой метод Международных стандартов, с использованием прямого посева на плотную железо-сульфитную среду, позволяет учитывать клостридии только в сильно загрязненных водах. Метод неспецифичен, так как рекомендует температуру инкубации 37°С и учет черных колоний диаметром более 3 мм после выращивания в течение 24—48 ч, хотя многие исследователи и мы показали непостоянство размера колоний. Температура 44°С допускается только как альтернативная.[ ...]
Простой ускоренный метод определения клостридии (Т. 3. Артемова, 1973). Модифицированную среду СПН в пробирках, разлитую высоким столбиком, осторожно расплавляют на водяной бане, избегая разрушения антибиотиков, и во время посева поддерживают нагретой до 50—60°С. Объемы воды (по 2—3 из каждой пробы) выбирают, ориентируясь по табл. 16 и учитывая, что клост-ридий содержится на 1,5—2 порядка меньше, чем БГКП. В каждой пробирке должно быть не больше 10—15 колоний, иначе зоны почернения среды вокруг них сольются и точный количественный учет будет затруднителен.[ ...]
Посевы 1 мл воды и по 1 мл из разведений (при исследовании сточных вод и сильно загрязненных водоемов) производят непосредственно в пробирку, заливают расплавленной средой (50—60°С) и быстро опускают в холодную воду для немедленного охлаждения и удаления воздуха из среды.[ ...]
Рисунки к данной главе:
| Содержание сульфитредуцирующих анаэробов в воде водоема в летний период. |
 |