Для определения температуры на месте взятия пробы воду в количестве не менее 1 л наливают в сосуд. Нижнюю часть термометра погружают в воду и через 5 мин отсчитывают показания термометра, держа его вместе с сосудом на уровне глаз.
Для определения температуры на месте взятия пробы воду в количестве не менее 1 л наливают в сосуд. Нижнюю часть термометра погружают в воду и через 5 мин отсчитывают показания термометра, держа его вместе с сосудом на уровне глаз.
Тщательно взбалтывают жидкость и наполняют ею цилиндр Лисенко до 500 или 1000 мл. Через 1 ч 45 мин осторожным поворачиванием цилиндра вокруг своей оси вызывают сползание осадка, осевшего на стенках сосуда. Через 10 мин еще раз повторяют это вращение. Через 5 мин, следовательно, через 2 ч от начала отстаивания, отсчитывают объем осадка и перечисляют на литр.
Величина прокаленного остатка дает ориентировочное представление о минеральном составе сточной воды.
При прокаливании пустого мембранного фильтра получается так мало золы, что ею можно пренебречь.Подготовленный мембранный фильтр, высушенный в сушильном шкафу при 105° С, помеченный карандашом, взвешенный на аналитических весах, помещают в прибор для фильтрования надписью вниз. Отмеренное количество иловой смеси пропускают через фильтр. Приставший к стенкам цилиндра ил смывают на мембранный фильтр небольшим количеством дистиллированной воды, приливая ее после того, как жидкость на фильтре хорошо отфильтрована. Фильтр с отфильтрованным илом переносят на лист фильтровальной бумаги и помещают в сушильный шкаф. Замечают время, когда температура поднимается до 105° С, после чего сушат 30—60 мин до постоянного веса (процесс занимает примерно 3 ч).
Содержание зольности активного ила выражают в % к сухому йесу ила.
Результаты определения выражают в виде отношения (в процентах) объема, занимаемого выпавшим илом, к объему взятой для определения иловой смеси. Эту величину находят для каждого времени отстаивания.Полученные результаты представляют обычно в виде кривых, откладывая по оси абсцисс время от начала опыта, в течение которого происходило отстаивание, а по оси ординат указанное выше процентное отношение.
Пробу в 50 мл или меньший ее объем, доведенный дистиллированной водой до 50 мл, переносят в колбу со шлифом для кипячения, прибавляют 25 мл 0,25 н. или 0,025 н. раствора бихромата калия и осторожно, малыми порциями вливают 75 мл концентрированной серной кислоты, тщательно перемешивая смесь после добавления каждой порции. Затем всыпают 0,3—0,4 г сульфата серебра, вводят в колбу несколько стеклянных бусинок или кусочков пемзы. После присоединения обратного холодильника смесь равномерно кипятят два часа (время кипячения следует устанавливать опытным путем, в некоторых случаях это может быть более двух часов), затем охлаждают, обмывают стенки холодильника 25 мл дистиллированной воды и переносят содержимое этой колбы в коническую колбу емкостью 500 мл, обмывая, стенки первой колбы несколько раз дистиллированной водой. Добавив дистиллированную воду до объема 350 мл, вводят 3—4 капли раствора ферроина или N-фенилантрониловой кислоты и оттитровывают избыток бихромата титрованным раствором соли Мора.
Склянку осторожно закрывают, так чтобы под пробкой не образовались пузырьки воздуха. Горлышко ополаскивают водой и содержимое хорошо перемешивают (переворачиванием склянки) до образования хлопьевидного хорошо выпадающего осадка. Осадку дают собраться на дне склянки. Раствор можно слить сифоном или же присоединить сифон к водоструйному насосу и отсосать. Отсасывание должно продолжаться 15—20 сек (более быстрое отсасывание может увлечь осадок). Сразу после отсасывания или сифонирования прозрачной жидкости над осадком в кислородную склянку по стенке приливают 5 мл разбавленной (1:4) серной кислоты и перемешивают. Затем прибавляют 2 мл раствора иодида калия и содержимое вновь перемешивают. По истечении 5 мин выделившийся иод титруют непосредственно в кислородной склянке титрованным раствором 0,05 н. тиосульфата до светло-желтой окраски. Затем прибавляют раствор крахмала и продолжают титрование до обесцвечивания. Индикатор обычно прибавляют в количестве 1—2 мл в зависимости от качества применяемого крахмала. Определение можно вести также следующим приемом.
Далее все реактивы, как в обычном методе Винклера.После этого закрывают пробкой, взбалтывают так, чтобы в склянке не было пузырьков воздуха, и ставят не менее чем на 30 мин в темное место. После этого в каждую кислородную склянку для устранения избытка ЫаСЮ добавляют по 1 мл раствора КСЙв.
Аппаратура. 1. Цилиндр — бесцветный сосуд высотою 15 см и диаметром 3,5 см с градуировкой на 50 мл.Обесцвечивание метиленовой синьки указывает конец реакции. При содержании растворенного кислорода ниже 2 мг/л в цилиндр сперва вливают очень чистое вазелиновое масло слоем 1 мм, под вазелиновое масло вливается испытуемая вода. Этим приемом уменьшается растворение кислорода в жидкости при определении.
При определении биохимической потребности в кислороде производственных сточных вод определяют «полное» биохимическое потребление кислорода: процесс ведут до появления азота нитритов в количестве, не превышающем 0,1 мг/л. Потребление кислорода за 5 суток дает очень большие колебания и не характеризует полной потребности жидкости в кислороде.
Биохимическое потребление кислорода можно определить методом разбавления и нитратным методом.Степень разбавления должна обеспечить определенный остаток растворенного кислорода по истечении Периода инкубации.
Через 10 и 20 суток производится определение тех же ингредиентов. Если в жидкости есть органические вещества, то содержание растворенного кислорода и нитратов заметно снижается при этом.Содержание нитритов может снижаться, но может и повышаться.
Остальные реактивы те же, что при определении БПК методом разбавления.Если испытуемую воду необходимо предварительно разбавить, то разбавляющую воду готовят, как описано в методе разбавления. Перед тем как разбавляющую воду разлить в склянки, добавляют к ней раствор хлористого аммония; чтобы концентрация его была 0,1 М.
Описываемый метод пригоден для вод, очищенных биологическим методом.Его нельзя применять к мутным речным водам в тех случаях, когда взвешенная в них глина дает частичное или полное поглощение индикатора, а также к водам, содержащим свободные щелочи или кислоты (с pH ниже 6 и выше 9), свободный хлор, гипохлориты, бисульфиты или бактерицидные средства — соли меди и пр.
В приемник, который представляет собой колбу для титрования емкостью 500 мл, наливают 25 мл 0,05 н. серной кислоты, и, если нужно, добавляют дважды дистиллированной воды, чтобы конец холодильника был погружен в жидкость.
В большом количестве они находятся в некоторых промышленных и биологически очищенных сточных водах.Двухвалентная медь занижает результаты вследствие каталитического распада диазотированной сульфаниловой кислоты. В этих случаях также пробу разбавляют.
По содержанию нитратов можно судить о процессе нитрификации в сооружениях биологической очистки. Значительные количества нитратов содержат некоторые сточные воды.Нитриты, если они присутствуют в растворе, предварительно удаляют добавлением мочевины или азида натрия.
Первую порцию около 50 мл отбрасывают. Отбирают 40 мл раствора в мерную колбочку на 50 мл. Содержание нитратов в пробе должно быть в пределах 0,002—0,08 мг. При необходимости пробу разбавляют дистиллированной водой до объема 40 мл. Раствор подкисляют 1 мл концентрированной серной кислоты, прибавляют 0,15 мл 40%-ного раствора мочевины и дают постоять 10 мин при комнатной температуре. Затем нейтрализуют 10 н. раствором едкого натра (или кали) до pH = 5-г-7 по индикаторной бумаге: лакмусовой, конго-рот или универсальной индикаторной, приливают 1 мл 1 н. раствора едкого натра и помещают в термостат, пока температура в нем не достигнет 28°С. После этого добавляют 1 мл рабочего раствора гидразина и выдерживают в термостате 30 мин при температуре 28° С. Затем прибавляют 0,5 мл ацетона и через 5 мин 2 мл раствора сульфаниловой кислоты, еще через 5 мин 1 мл альфа-нафтиламина и 1 мл ацетата натрия. После добавления каждого реактива раствор тщательно перемешивают. Объем пробы доводят до метки, и через 15 мин измеряют экстинкцию на фотоколориметре в кюветах длиной 3 см со светофильтрами с ?ь=530 ммк. В качестве глухого опыта применяют дистиллированную воду со всеми реактивами. Содержание нитратов в пробе находят по калибровочной кривой.
После удаления нитритов из раствора нитраты определяют восстановлением гидразином до нитритов.Те же, что и при определении нитратов с применением мочевины для восстановления нитритов.Соляная кислота разбавленная (1:4). Азид натрия №N3, 0,1%-ный водный раствор: 1 г №N3 растворяют в воде и раствор доводят до 1 л.
Для этого пропускают испытуемый раствор через №-катионит, отбрасывают первую порцию раствора (около 50 мл), отбирают 40 мл для определения нитратов восстановлением до нитритов гидразином и поступают, как описано ранее в ходе определения, начиная с добавления к испытуемому раствору 1 мл 1 н. раствора едкого натра.
Если сухой остаток после прибавления серной кислоты окрасится присутствующими растворенными органическими веществами, то этот метод неприменим.Определению мешают хлориды в количествах, превышающих 200 мг/л.
Нитриты необходимо определить отдельно и полученный результат вычесть из результата определения нитратов.С этой целью до прибавления щелочи и до отгона к 250 мл испытуемой воды прибавляют 2 мл серной кислоты и перемешивают. Затем по каплям прибавляют при перемешивании необходимое количество 0,1 н. раствора перманганата калия или 3%-ного раствора перекиси водорода. Перманганат добавляется в таком количестве, чтобы розовая окраска не исчезала в течение 15 мин. Избыток перманганата вредит.
Органический азот в поверхностных и сточных водах определяется в виде аммиака после минерализации пробы серной кислотой при каталитическом действии ртутной соли.Отгонкой при рН=7,4 отделяют аммиак. Кубовый остаток затем минерализуют нагреванием со смесью серной кислоты и сульфата калия при температуре 345—370° С. Органически связанный азот переходит при каталитическом действии сульфата ртути в бисульфат аммония. После подщелачивания минерализованной пробы аммиак отгоняется и собирается в раствор кислоты, в которой затем определяется титрованием или колориметрически. Титрованием можно определить не менее 1 мг/л, колориметрически — менее 2 мг/л.
Определение общего азота производится лишь в случае подведения баланса по азоту. Излагаемый метод опубликован в «Унифицированных методах исследования качества воды», ч. 1 «Методы химического анализа вод», раздел 1 (издат. СЭВ, 1965).
Биохимические процессы можно приостановить прибавлением 2—4 мл хлороформа на 1 л пробы. Пробу нельзя консервировать добавлением кислоты.Определение общего фосфора производится только в том случае, если сточная вода содержит минеральные и органические фосфорсодержащие соединения.
Чувствительность метода высокая. Молярный коэффициент светопоглоще-ния равен 13000. Минимально определяемая концентрация 0,025 мг/л Р.После охлаждения до комнатной температуры раствор доводят до 1 л. Хранят в бутыли из темного стекла.
При гидролизе конденсированных фосфатов (полифосфатов) частично происходит гидролиз и органических фосфатов. При разложении органических фосфатов гидролизуются также количественно полифосфаты. По этой причине проводят суммарное определение всех растворенных фосфатов, результаты которого, за вычетом содержания ортофосфатов, характеризуют суммарное количество растворенных, конденсированных и органических фосфатов.
После минерализации в присутствии окиси магния определяют «общий фосфор» осаждением в виде фосформолибдата.После охлаждения остаток обрабатывают соляной кислотой и жидкость с нерастворившимся остатком переносят в стакан. Содержимое стакана кипятят, фильтруют, фильтр промывают дистиллированной водой и объем фильтрата доводят до 50 мл дистиллированной водой. В стакан добавляют затем 15 мл раствора нитрата аммония и 10 мл разбавленной азотной кислоты.
Летучие кислоты жирного (алифатического) ряда попадают в сточные воды от пирогенного разложения топлива, от производства уксусной кислоты и сложных эфиров, синтетического каучука и т. п. Кроме того, они образуются в сточных водах в результате процесса брожения органических веществ. Метод определения этих кислот состоит в отгонке их из сточной воды после подкис-ления последней фосфорной кислотой и в титровании отгона едкой щелочью в присутствии фенолфталеина в качестве индикатора.
Прибавляют 2,5 мл раствора сульфида натрия, 3—5 капель раствора фенолфталеина и затем осторожно по стенке колбы так, чтобы жидкости не смешивались, вливают 50 мл раствора едкого натра. Сейчас же включают колбу в собранную установку для отгонки (в приемник наливают 10 мл 0,05 н. раствора серной кислоты с несколькими каплями смешанного индикатора). Осторожно, вращая, смешивают в ней оба слоя жидкости (жидкость должна окраситься в красный цвет) и начинают нагревание. Конец трубки холодильника должен быть погружен в раствор серной кислоты, находящейся в приемнике.
К фильтрату с присоединенными к нему промывными водами приливают 1—2 мл раствора железо-аммонийных квасцов и титруют 0,1 н. или соответственно 0,01 н. раствором роданида до появления не исчезающего при взбалтывании розового окрашивания.
Умножая найденный вес прокаленного осадка на 0,4115, получают вес 5042 и пересчитывают его на 1 л анализируемой воды.Если в сточной воде содержится много кремневой кислоты, то необходимо предварительно ее отделить. При большом содержании в сточной воде железа рекомендуется предварительно восстановить его до двухвалентного. Минимальное количество сульфатов, определяемое по этому методу, составляет 2 мг/л.
Если в сточной воде присутствует большое количество органических веществ, содержащих серу (например, меркаптанов), окисление бромной водой бывает недостаточным. В этом случае пробу сточной воды, помещенную в коническую колбу емкостью 250—300 мл, подщелачивают 1—2 мл едкой щелочи или соды и при перемешивании добавляют к ней от 1 до 4 мл брома (в зависимости от содержания окисляющихся веществ) и 5 мл хлороформа или четыреххлористого углерода.
Выделившийся иод оттитровывают, как обычно, тиосульфатом натрия в присутствии крахмала. Содержание «активного хлора» выражают в мг/л в пересчете на хлор.Отметим, что в отношении хлорноватистой кислоты и гипохлорит-ионов такое выражение результатов анализа условно и может привести к некоторым недоразумениям, так как 1 г-моль хлорноватистой кислоты (или 1 г-ион СЮ“) выделяет 2 г-атома иода и, следовательно, соответствует 2 г-атом «активного хлора». Иначе говоря, при содержании в воде 52,5 мг хлорноватистой кислоты «ли 51,5 мг гипохлорит-ионов в ней будет найдено 71 мг «активного хлора», т. е. больше, чем имеется в воде хлора в виде указанных веществ.
Для отбора газа на анализ к патрубку газопровода присоединяют каучуковую трубку и, открыв вентиль, промывают ее газом от воздуха, отжимая трубку пальцами несколько раз сверху донизу. После этого к трубке присоединяют конец газовой пипетки. Пипетку и концы ее предварительно заполняют запорной жидкостью 25%-ным раствором хлористого натрия, подкисленного несколькими каплями соляной кислоты. Затем открывают верхний, потом нижний кран пипетки. Вытесняемую газом запорную жидкость собирают в сосуд, в котором хранилась газовая пипетка.
Посев более 1 мл и менее 0,1 мл не разрешается.Для приготовления каждого разведения берут отдельную стерильную пипетку.Из каждого разведения рекомендуется делать посевы в 2 чашки. На чашках должно вырасти при правильно выбранных разведениях не менее 30 и не более 300 колоний.
Из аэротенка отбирается иловая смесь в количестве 7—10 мл. Ил отстаиванием отделяется от жидкости (что занимает обычно 2—3 мин) и затем подвергается микроскопированию.С различных горизонтов биофильтра отбирается загрузочный материал (шлак, щебень, керамзит и др.) в количестве 8—10 шт., помещается в фарфоровую чашку и заливается небольшим количеством дистиллированной воды. С загрузочного материала поверхностного слоя и с глубины до 0,5 м пленку обычно приходится счищать препаровальными иголочками, с нижних слоев она легко смывается. Количество пленки замеряется по объему, а также определяется сухой вес и зольность. Одновременно замеряется объем взятого загрузочного материала. Расчет прироста пленки ведется на 1 мл шлака (по безвольному веществу). Для микроскопирования биопленка отбирается пипеткой с широким отверстием.
Описание микроскопов и инструкция к пользованию прилагаются к микроскопу.
Организмы могут служить индикаторами лишь при значительном развитии их.Примечание. Помимо приведенных организмов встречаются круглые черви Nematodes (рис. 43), личинки и куколки насекомых (личинка мушки Psychoda (рис. 44), ее куколка (рис. 45): Podura (рис. 46) и водные клещи (рис. 47).
Выделение чистой культуры производят следующим образом: колонии, выросшие на чашках, вначале просматриваются под лупой и под микроскопом при увеличении 8X15, чтобы убедиться в их однородности. Намеченную к выделению колонию отмечают. Затем осторожно, слегка приоткрыв чашку, не задевая другой колонии, берут стерильной петлей немного материала из этой колонии и переносят в пробирку со скошенной твердой средой (МПА, или спецагар) .
Мутность: временная, постоянная, слабая, умеренная, сильная, однородная; нет.Осадок: плотный, хлопьевидный, скудный, обильный, слизистый, тягучий при встряхивании; нет.Запах: отсутствует, присутствует, похожий на ... .
Хранить стекла рекомендуется в банках с 95°-ным спиртом или в сухом виде (в чашках Петри).Для очистки покровных стекол, бывших в употреблении, стекла несколько раз кипятят в смеси 6%-ных растворов двухромового калия и серной кислоты, затем ополаскивают вначале дистиллированной водой, затем спиртом, в котором стекла и хранят. Перед употреблением их вытирают. Поверхность стекла должна быть совершенно чистой. Капля воды, нанесенная на стекло, должна равномерно растекаться по нему, не собираясь в мелкие капельки, что наблюдается, когда стекла плохо обезжирены.
На стерильное покровное стекло наносят небольшую каплю бактериальной суспензии, приготовленной на жидкой питательной среде или физиологическом растворе (физиологический раствор для бактерий содержит 0,5% раствора ЫаС1).
Объект-микрометр помещают на столик микроскопа и при тех же увеличениях, при которых производят измерения микробов, определяют, сколько делений окуляр-микрометра придется на одно деление объект-микрометра. Так, если два деления объект-микрометра соответствуют 5 делениям окуляр-микрометра, то одно деление окуляр-микрометра равно 4. По установлении значения деления в дальнейшем пользуются уже только окулярным микрометром, но всегда при одном и том же увеличении микроскопа.
Для уверенности в правильном проведении окраски В. Л. Омелянский рекомендует следующий прием. На предметное стекло наносят рядом 3 мазка; один заведомо красящегося по Граму вида, другой некрасящегося и третий исследуемого вида. О правильности окраски судят по виду двух контрольных мазков.
На фиксированный мазок наливают метиленовую синь Леффлера и доводят ее до кипения, держа препарат над пламенем горелки. Кипятят 15—20 сек. Затем смывают водой и докрашивают 0,5%-ным водным раствором нейтрального красного красителя 30 сек. Промывают дистиллированной водой, высушивают и смотрят с масляным иммерсионным объективом . Споры голубые или синие. Молодые споры черно-синие. Протоплазма вегетативных клеток розовая. Окрашивание спор этим способом хорошо получается лишь в тех случаях, когда культура взята в тот момент, когда споры в клетках уже успели вполне созреть, но еще не выпали из вегетативных клеток, в которых они образовались.
Готовят препарат и высушивают его на воздухе. Затем препарат в течение 1 мин окрашивают кипящим раствором метиленовой синей, промывают дистиллированной водой и докрашивают в течение 5 сек раствором фуксина; ополаскивают водой, высушивают и исследуют. Бактерии окрашиваются в синий цвет, капсулы — в розовый.
При изучении жгутиков с помощью обычного микроскопа используют раз личные протравы.Готовят основной 20%-ный раствор кристалл-виолет на абсолютном спирте, который перед употреблением разводят абсолютным спиртом 1/200, 1/100, 1/50. В небольшой фарфоровой чашечке смешивают 5 мл протравы и 0,5 мл краски и нагревают до кипения. Одну каплю капают на препарат, окрашивают его 20—30 сек и хорошо ополаскивают, чтобы смыть пленку, образующуюся на поверхности протравы и оседающую на препарате. Препарат сушат и просматривают под микроскопом с масляной иммерсией. Клетки бактерий окрашиваются в темно-лиловый цвет, а жгутики красятся слабее.
К мясо-пептонному бульону с содержанием 1%-ного хлористого натра прибавляют 10% чистого гуммиарабика в порошке. Его растворяют при нагревании и затем бульон осветляют, как желатину, куриным белком. Проверяют капельку осветленной среды в темном поле на отсутствие гранул. Среда должна быть совершенно чистой и не содержать светящихся зернышек. Если они есть, то просветленный гумми-бульон подвергают центрифугированию для удаления зернышек. Убедившись в полном удалении зернышек, гумми-бульон разливают в ампулы по 0,25—0,5 мл; ампулы запаивают и стерилизуют в аппарате Коха или под давлением. Такой бульон хранится годами.
Готовят два раствора: 1) кристаллвиолет (90%-ное содержание краски) — 0,4 г; этиловый спирт 95°-ный — 10 мл; 2) фенол—1 г; дистиллированная вода — 95 мл.Готовят 2 раствора: 1) метиленовая синяя (90%-ное содержание краски)—■ 0,3 г; этиловый спирт (95°-ный) — 30 мл 2) раствор КОН (0,01 % по весу) — 100 мл.
Затем, для того чтобы установить, какое количество щелочи нужно дать для того, чтобы была нейтральная среда, к 20 мл бульона добавляют из бюретки 10%-ный раствор соды или едкого натра до слабощелочной реакции по лакмусу pH=7- 7,2. Соответствующим пересчетом количества щелочного раствора, пошедшего на подщелачивание 20 мл бульона, определяют то количество щелочи, которое необходимо для подщелачивания всего объема МПБ.
Можно осветлять агаровые среды следующим приемом: среду наливают в высокий сосуд, нагревают в кипятильнике Коха или в автоклаве и затем дают медленно остыть; муть собирается на дне сосуда. Затем сосуд опускают на короткое время в горячую воду, агар из него вытряхивают и ножом отрезают мутную часть.
Если среда желтоватого цвета, то ее pH ниже 7,2, если красного цвета, то ее pH выше 7,6. В первом случае среду надо подщелочить раствором едкого натра (0,5%-ным) или углекислого натрия (10%-ным), а во втором подкислить раствором соляной кислоты (10%-ной) до нужного оттенка. При отсутствии бромтимолового синего индикатора среда может быть приготовлена без него. В этом случае она имеет розовый цвет.
Смесь должна прокипеть 3—4 мин. Затем ее перемешивают и разливают в чашки Петри.Каждая новая серия используемой сухой среды проверяется на рост бактерий и сравнивается с серией, уже использованной ранее.
К этой минеральной среде добавляют в количестве 0,1—1% испытуемый источник углерода. Обычно испытывают: глюкозу, левулезу, галактозу, лактозу, сахарозу, мальтозу (при наличии этих веществ в среде стерилизацию ведут при 100°С в аппарате Коха); соли органических кислот: муравьиную, уксусную, масляную и другие; спирты: этиловый, глицерин, маннит; фенольные соединения; различные альдегиды, кетоны и другие источники углерода.
Сусловый агар готовится на неохмеленном сусле 7“ Баллинга и смешивается в горячем состоянии с равным объемом расплавленного мясо-пептонного агара. Реакцию среды доводят до рН=7,1-ъ7,2. Среду разливают небольшими порциями и стерилизуют.
Исследуемый ил (биопленку) вносят в стерильные пробирки и заливают агаровой средой высотой столба на 2/з- Закрывают ватной пробкой и помещают в термостат при 30° С, через сутки анаэробы образуют черные колонии, окруженные темной зоной из отложения РеБ.
При приготовлении сред с мочевиной рекомендуется сначала стерилизовать среду без мочевины при 120° С, а затем добавлять мочевину и стерилизовать текучим паром, так как при повышении температуры мочевина в водных растворах разлагается.
Мочевина — 20 г; желатина — 150 г (или агар-агар—15 г); мясной бульон — 1 л. Реакция среды устанавливается около 7,5 pH.Можно к стерильным МПА и МГ1Ж прибавить /ш часть 15%-ного стерильного раствора мочевины и разлить эту среду на чашки.
На этой среде выявляют бактерии, способные перерабатывать белки и близкие к белкам соединения.Чтобы предохранить потерю аммонийных солей, рекомендуется углекислые соли стерилизовать отдельно. После остывания среды углекислая соль добавляется отдельно в каждую колбу.
Смесь микроэлементов готовят отдельно. Концентрированный раствор микроэлементов стерилизуют в автоклаве и используют по мере надобности, беря асептически стерильной пипеткой необходимое количество.Среды разливают по колбам высотой 1—1 /2 см и стерилизуют под давлением при 110°. После остывания среды ее заражают активным илом (биопленкой) и ставят в термостат при 25°С. Развитие азотобактера наступает на 2—3-й день. Для получения твердой среды добавляют 1,5% агара.