Экология СПРАВОЧНИК

Визуальное выявление вирусного заболевания по симптомам не является надежным методом при селекции исходных растений. Более надежные методы идентификации здоровых и зараженных растений необходимы, и они существуют. Какой из них следует применить в каждом частном случае, это зависит от вируса и от растения-хозяина. Идентификация многих вирусов (в особенности тех, которые поражают древесные породы) — весьма трудоемкое дело. Основным методом является в этом случае прививка одному или нескольким индикаторным растениям. Распределение вируса по дереву, ■особенно на ранних стадиях инфекции, может быть неравномерным; поэтому, для того чтобы убедиться в отсутствии вируса, необходимо повторять эти тесты в течение нескольких лет. Так, Хамптон [700], прививавший по четыре почки с исследуемого растения на каждое индикаторное дерево, обнаружил, что в течение первого года вирус карликовости сливы на растениях вишни определялся не всегда (29—63%, в зависимости от сорта). Вероятность выявления инфекции н значительной степени возрастала в том случае, когда дерево было заражено уже в течение трех лет. Неравномерное распределение вируса может иметь место к у травянистых растений (гл. VII). Бимстер [138], в .частности, обнаружил, что при заражении картофеля У-вирусом инфицируются не все клубни и даже не обязательно все части одного и того же клубня. Нижняя часть клубня бывает заражена реже, чем верхушка. Таким образом, верхушка клубня является более падежным материалом для тестирования.[ ...]

Для идентификации многих вирусов можно использовать метод механической инокуляции индикаторных растений. Используется и серологический анализ, а также различные цитологические (см., например, [1429]), электронно-микроскопические и химические тесты [1072]. Однако наиболее надежным методом выявления здоровых растений остается все же постановка тестов на нпфекционпость.[ ...]

Получение безвирусного материала в естестве н п ы х уел о в и я х. Иногда на каком-то определенном участке можно обнаружить отдельные растения данного сорта, пе зараженные вирусом. Если здоровых растений найти пе удается, то иногда можно воспользоваться тем обстоятельством, что вирус распределяется по растению неравномерно. Особенно это относится к некоторым вирусам, поражающим плодовые деревья. В таких случаях с непораженных частей дерева берут почки. Иногда вирус, который системно распространяется по всему растению, не успевает проникнуть в кончики побегов быстрорастущих стеблей. Именно благодаря этому Холмсу [821] удалось получить растения георгин, свободные от вируса бронзовости томатов. Соответствующая процедура успешно используется при работе с некоторыми вирусами и определенными растегшя-ми-хозяевами. Однако многие растения, размножающиеся вегетативным путем, поражены тем или иным вирусом практически на 100%. В этих случаях, для того чтобы получить здоровый исходный материал, следует пользоваться каким-либо из специальных методов, описанных ниже.[ ...]

Тепловой обработке можно подвергать два разных вида растительного-материала. Покоящиеся части растений (клубни, древесные почки, черенки сахарного тростника) обычно выдерживают более высокие температуры, чем растущие ткани; эффект обработки в этом случае, по всей вероятности, связан с прямой инактивацией вируса. Температурные режимы и продоляш-тельность обработки варьируют очень широко (от 35 до 54 °С, от нескольких минут до нескольких часов). Часто для прогревания используют горячую воду, так как при кратковременной обработке горячим воздухом растительный материал, как правило, равномерно пе прогревается. Если ткани не полностью гидратированы, то обработка сухим теплом значительно менее эффективна, чем обработка горячей водой.[ ...]

Гораздо чаще, однако, тепловой обработке подвергают растущие ткани. При этом, как правило, применяют обработку горячим воздухом, а пе горячей водой. Прогревание обычно проводится в течение нескольких недель при температуре 35—40 °С. Такая обработка обеспечивает наиболее высокую выживаемость растительного материала. Условия проведения тепловой обработки варьируют очень широко и подбираются эмпирически для каждой комбинации вирус—растение. На фиг. 95 показана зависимость гибели клубней картофеля, а также инактивации вируса скручивания листьев от времени и температуры.[ ...]

Очень часто сразу же после прогревания от обработанных побегов отделяют самый кончик верхушки, так как этот кончик иногда уже не содержит вируса, в то время как остальная часть побега еще остается инфекционной.[ ...]

От некоторых стабилышх вирусов, таких, как ВТМ, нельзя освободиться прогреванием растительной ткани. В настоящее время мы не располагаем никакими критериями, чтобы сказать заранее, может ли растение того или иного вида быть таким способом освобождено от какого-то определенного вируса или же пет. Пока еще не ясно, какие механизмы лежат в основе освобождения ткани от вируса: вероятно, они включают в себя и инактивацию у>ке синтезированного интактного вируса и нарушение репродукции вируса.[ ...]

В случае стабильных вирусов, таких, как Х-вирус картофеля, отдельные части растения можно освободить от инфекции, выдерживая растение в течение нескольких месяцев при сравнительно низких температурах (около 35 °С). Меллор и Стейс-Смит [1197] указали, что очень важно начинать такую обработку осенью или зимой, чтобы успеть закончить ое до начала вегетации. Им удавалось освободиться сразу от двух вирусов картофеля, а именно от X- и 5-вируса, выращивая растения картофеля в течение нескольких месяцев при 33—37 °С, после чего пазушные почки (длиной 0,3—1,0 мм) отделяли от растения и выращивали па питательной среде [1656].[ ...]

Культивирование апикальной меристемы. В гл. VII мы уже говорили о распределении вируса по апикальной меристеме. Культивирование апикальной меристемы оказалось весьма эффективным методом освобождения вегетативно размножающихся растений от некоторых вирусов. Холдинге [811] показал, что в культуре апикальной меристемы стерильным остается конус нарастания и первая пара листовых зачатков. У различных растений длина этого участка колеблется от 0,1 до 0,5 мм, тогда как длина кончика верхушки, отделяемого после прогревания (см. выше), обычно составляет 0,5—2 см. Минимальный размер апикального участка, из которого можно вырастить целое растение, у разных видов различен. У ревеня, например, он составляет 0,3 мм (или больше) [1855]. На фото 93 показан участок апикальной меристемы картофеля, который обычно используется для выращивания безвирусньтх растений.[ ...]

Для регенерации целого растения во многих случаях необходимо (по крайней мере при существующих методах культуры ткани), чтобы культивируемый участок меристемы включал хотя бы один листовой зачаток.[ ...]

Рисунки к данной главе:

Зависимость инактивации вируса скручивания листьев в клубнях картофеля (I) н гибели самих клубией {II) от времени и температуры [514].