Поскольку связывание «субстрата» с ферментом является специфичным, скорость химической реакции, протекающей в пределах фермент-«субстратного» комплекса, чаще всего достаточно высока благодаря энтропийному преимуществу ее над простой бимолекулярной реакцией в растворе. Следовательно, соединения, которые обычно обладают низкой реакционной способностью, могут стать очень реакционноспособными аффинными метками.[ ...]
Ферменты всегда таят в себе много неожиданного для энзи-молога. Так, например (см. гл. 12, разд. Е.2), аффинная метка 1,2-ангидро-0-маннитол-6-фосфат присоединяется к остатку глутаминовой кислоты в глюкозо-6-фосфатизомеразе [78].[ ...]
Установлено, что в этом случае имеет место кинетика с насыщением, субстраты препятствуют модификации, стехиометрия инактивации равна 1 : 1, а рН-зависимость к дает значения р/Са для комплексов фермента с ингибитором, близкие к р/Са фермент-субстратного комплекса. Однако результаты кристаллографического анализа позволяют предположить, что модифицировалась не та группа, которую имели в виду, а другое участвующее в катализе основание (гл. 12, разд. Е.2) [79]. Если все обстоит именно так, то неожиданный результат интереснее ожидаемого, поскольку тем самым обнаружена важная, не известная ранее каталитическая группа.[ ...]
Эта реакция катализируется ионами меди, что, вероятно, обусловлено образованием комплекса карбена с медью [80]. Известно, что карбен, у которого на внешней оболочке находится только шесть электронов, присоединяется к неионизированным карбоксильным группам по связи О—Н.[ ...]
Фоточувствительные аффинные метки оказались очень полезными при картировании аминокислотных остатков в активных центрах ферментов и в центрах связывания белков (например, антител). Для кинетических исследований более удобны обычные аффинные метки, поскольку они специфичны в отношении основных и нуклеофильных групп, которым в катализе принадлежит главная роль, и позволяют получить информацию о р/Са модифицируемых групп.[ ...]
В настоящее время синтезированы сотни аффинных меток; в основе большинства из них лежат галоидметилкетоны или эпоксиды. Перечень меток ежегодно приводится в периодических сообщениях для специалистов «Аминокислоты, пептиды и белки», издаваемых Химическим обществом Великобритании.[ ...]
Вернуться к оглавлению