Позже аналогичные эксперименты были проведены и с многими другими ферментами. Однако наличие всплеска может быть обусловлено не накоплением промежуточных соединений, а причинами иной природы, что всегда следует иметь в виду. Ниже рассмотрено несколько примеров такого рода.[ ...]
При смешивании эфира (например, этилового эфира ацетил-L-фенилаланина) с химотрипсином и профлавином происходит следующее. Связывание субстрата с ферментом сопровождается быстрым вытеснением некоторого количества профлавина из активного центра, что приводит к уменьшению А465. Когда образуется ацилфермент, равновесие между эфиром и профлавином при их связывании ферментом смещается, приводя к полному вытеснению профлавина. Поглощение остается постоянным до тех пор, пока не израсходуется весь эфир и не исчезнет ацилфермент. Зная количество вытесненного на первом этапе профлавина, можно рассчитать константу диссоциации фермент-субстратного комплекса, а из второй, экспоненциальной фазы получить константу скорости ацилирования.[ ...]
Метод вытеснения профлавина значительно более удобен, чем использование соединений, содержащих фурилакрилоило-вую группу, поскольку нет необходимости синтезировать специальные субстраты; при работе со всеми субстратами можно использовать одно легкодоступное соединение. Вообще говоря, модифицированными субстратами лучше не пользоваться совсем, поскольку к трудностям, связанным с химическим синтезом, добавляются сомнения, правильно ли эти соединения идентифицированы.[ ...]
Вернуться к оглавлению