При смешивании эфира (например, этилового эфира ацетил-L-фенилаланина) с химотрипсином и профлавином происходит следующее. Связывание субстрата с ферментом сопровождается быстрым вытеснением некоторого количества профлавина из активного центра, что приводит к уменьшению А465. Когда образуется ацилфермент, равновесие между эфиром и профлавином при их связывании ферментом смещается, приводя к полному вытеснению профлавина. Поглощение остается постоянным до тех пор, пока не израсходуется весь эфир и не исчезнет ацилфермент. Зная количество вытесненного на первом этапе профлавина, можно рассчитать константу диссоциации фермент-субстратного комплекса, а из второй, экспоненциальной фазы получить константу скорости ацилирования.
Скачать страницу
[Выходные данные]
