Существует несколько методов прямого титрования определенных ионизирующихся боковых цепей в белках. Одна из основных проблем заключается в идентификации данной группы.[ ...]
ЯМР-спектроскопия на ядрах 13С позволяет определить р/Са остатков лизина и аспартата. Ионизация остатков тирозина исследовалась с помощью ПМР.[ ...]
Карбоксильные группы поглощают электромагнитные волны с частотой — 1710 см-1, а карбоксилаты — с частотой 1570 см-1. Разностные ИК-спектры, снятые в 020, позволили определить р/Са необычных карбоксильных групп а-лактоглобулина (7,5), лизоцима (2,0; 6,5) и трипсина (Авр-102; 7).[ ...]
Разностная УФ-спектроскопия часто используется при исследовании ионизации фенольного гидроксила тирозиновых остатков, а также при изучении свойств сульфгидрильных групп цистеина и имидазольных групп гистидина.[ ...]
Этот метод весьма полезен в тех случаях, когда при ионизации группы изменяется спектр флуоресценции соседнего с ней триптофана — главного флуоресцирующего остатка в белках, или происходит конформационное изменение в белковой молекуле, изменяющее спектр флуоресценции белка в целом. В отсутствие триптофана (который обладает относительно сильной флуоресценцией) можно следить за флуоресценцией тирозина.[ ...]
Аминогруппы модифицировали реагентами, меченными радиоактивными изотопами, затем белок гидролизовали, разделяли пептиды и измеряли их удельную радиоактивность. Таким способом можно найти р/Са нескольких групп одновременно, что и было сделано для эластазы и химотрипсина.[ ...]
В видоизмененном варианте этого метода измеряется скорость обмена трития (из Т20) с протоном, связанным с С-2-атомом имидазольного кольца гистидина [18, 31, 32]. Константа скорости обмена зависит от состояния ионизации имида-зола и является более высокой для непротонированной формы. Описанный метод дополняет метод ЯМР, который также позволяет измерять р/Са гистидина. Эти эксперименты весьма трудоемки, однако с их помощью можно однозначно идентифицировать р/Са.[ ...]
Вернуться к оглавлению