Начиная с самых ранних этапов исследования вирусов растений в качестве признака, служащего для идентификации вирусов, использовали так называемую «термальную точку гибели», причем опыт проводили в свеже-•отжатом соке листьев. Для различных вирусов самые высокие температуры, при которых после нагревания в течение 10 мин еще можно обнаружить некоторую инфекционность, лежат в пределах 40—95 °С, а для многих из них — в пределах 50—60 °С. Концентрация вируса в исходном материале, pH и состав сока, характер материала, используемого для разбавления, состояние испытуемых растений — все это может влиять на результаты подобного рода исследований. Для более детального изучения процесса тепловой инактивации вирусов используют очищенные вирусные препараты.[ ...]
Фит. 54. Тепловая денатурация БТМ [1049].[ ...]
По оси ординат отложен десятичный логарифм концентрации (мг/мп) ВТМ, сохраняющего растворимость, до оси абсцисс — продолжительность нагревания при 69,8 “С в 0,1 М фосфатном Оуфоре, pH 7,0.[ ...]
Лауфер и Прайс [1049] показали, что на скорость тепловой денатурации сильно влияет величина pH раствора. Например, при 71 °С денатурация происходила приблизительно в 3500 pas быстрее при pH 7,05, чем при pH 5,77. В поставленных ими опытах вирус терял инфекционность даже несколько быстрее, чем денатурировался белок.[ ...]
При исследовании фосфатных концевых групп, образующихся во время тепловой инактивации РНК ВТМ, Гордон и Хаф [663] пришли к выводу, что разрыв нолинуклеотидной цепи не приводит к образованию моноэфирных фосфатных групп (2 , 3 и 5 ). Они полагали, что разрыв цепи при pH 6,8, по-видимому, приводит к образованию концевого 2 , З -циклического фосфата.[ ...]
Очевидно, что РНК описанных нами палочкообразных вирусов надежно защищена и стабилизирована белковой оболочкой. При тепловой денатурации оболочка удаляется и РНК может подвергнуться термическому расщеплению (которое катализируется следовыми количествами некоторых металлов) и, что более важно, действию загрязняющих препарат рибонуклеаз, которые часто сохраняют активность при относительно высоких температурах. Примеси нуклеаз, вероятно, присутствовали во многих вирусных препаратах, которые использовали для изучения тепловой денатурации.[ ...]
Тепловой инактивации мелких сферических вирусов присущи несколько иные особенности. Так, для вируса кустистой карликовости томатов и вируса некроза табака значение (?10 для тепловой инактивации невелико, так что имеется довольно широкий интервал температур, в пределах которых наступает частичная потеря инфекционности. Для таких вирусов потеря инфекцион-ности не связана непосредственно с денатурацией вирусного белка. Можно получить препараты, полностью утратившие инфекционность, однако при этом они неотличимы от инфекционных препаратов по своей антигенной специфичности, способности кристаллизоваться и другим свойствам [94].[ ...]
Для штаммов вируса некроза табака было проведено более детальное изучение процесса тепловой инактивации [55]. Эти штаммы инактивировались таким образом, как будто они содержали смесь более устойчивого и менее устойчивого компонентов. Гордон и др. [666] отметили подобное же отклонение от кинетики первого порядка для реакции инактивации изолированной РНК вируса полиомиелита (в отличие от РНК ВТМ, дававшей линейную зависимость в определенном диапазоне температур). Характер инактивации разных штаммов вируса некроза табака был различным, но для каждого данного штамма кривые инактивации вируса и свободной РНК были идентичны (фиг. 55).[ ...]
Таким образом, особенности процесса инактивации, характерные для двухкомпонентной системы, можно объяснить изменениями только в самой молекуле РНК. Природа этих изменений пока точно не установлена, но они могут быть обусловлены присутствием молекул PITK с различной вторичной структурой. Тот факт, что РНК, выделенная из различных штаммов вируса некроза табака, отличалась по скорости инактивации, позволяет предположить, что помимо фосфодиэфирных связей в стабилизации молекул PITK при тепловой инактивации участвуют еще и другие связи.[ ...]
Что касается инактивации интактного вируса некроза табака, то препараты, сохранившие лишь 1—0,1% инфекционности после нагревания в дистиллированной воде или в фосфатном буфере, не отличались от исходного вируса по серологической активности, внешнему виду частиц в электронном микроскопе и седиментационным свойствам. Инактивация не сопровождалась высвобождением из вирусных частиц поглощающего ультрафиолет материала.[ ...]
Вернуться к оглавлению