Не очень точную, но быструю информацию об относительном содержании вирусных частиц в препаратах можно получить путем применения метода контрастирования вирусных частиц фосфовольфрамовой кислотой и последующего анализа препаратов в электронном микроскопе. Чтобы точно определить число вирусных частиц с помощью электронного микроскопа, необходимо знать объем исследуемого раствора и суметь сосчитать все частицы, находящиеся в этом объеме. Бекас и Вильямс [58] описали метод, согласно которому образцы вирусов разбавляются растворами, содержащими летучие соли (ацетат или карбонат аммония). Затем вирусный препарат смешивают с раствором, содержащим частицы полистиролшого латекса какой-то определенной концентрации, а также известной и однородной формы. Смесь распыляют с помощью пульверизатора на пленку-подложку, которая должна находиться на таком: расстоянии от пульверизатора, чтобы микрокапли попадали именно на нее. Капли должны быть достаточно мелкими, чтобы их можно было легко различить в электронном микроскопе при увеличении, необходимом для идентификации вирусных частиц (около х Ю 000). Можно использовать капли диаметром 5—10 мкм, но капли диаметром в пределах 1—3 мкм предпочтительнее. На фото 2 представлена электронная микрофотография капли, используемой для такого анализа.[ ...]
Число частиц полистирольпого латекса, присутствующих в капле, можно подсчитать на микрофотографиях и таким образом определить объем капли. Одновременно в капле подсчитывается число характерных вирусных частиц. Соотношение числа вирусных частиц и числа частиц латекса варьирует в разных каплях. Поэтому для получения надежной оценки числа частиц следует исследовать несколько капель и результаты подвергнуть статистической обработке [1110, 1914].[ ...]
При таком подсчете имеется два источника ошибок: 1) неизбежные колебания, обусловленные броуновским движением вирусных частиц и частиц латекса в растворе; 2) различные привходящие обстоятельства, обусловленные отклонениями от точной схемы опыта, такими, как недостаточное смешивание или загрязнение во время распыления.[ ...]
Процесс подсчета вирусных частиц — это довольно трудоемкий процесс, а при попытках определения числа частиц мелких изометрических вирусов в растворах, содержащих значительное количество нелетучих веществ, возникают, кроме того, дополнительные трудности, поскольку эти вещества обычно скапливаются по краям капли, не позволяя таким образом рассмотреть вирусные частицы. Однако этот метод представляется ценным, особенно при исследовании палочкообразных вирусов, когда необходимо выяснить распределение частиц по длине (см., например, [725]).[ ...]
Пиитерик и Тейлор [1333] описали методический прием, названный ими методом уменьшающейся капли. При этом макрокапли вирусной суспензии подсушивают таким образом, чтобы вирусные частицы на пленке-подложке распределились равномерно. Хорошее распределение частиц было получено лишь при добавлении к суспензии какого-либо белка, например сывороточного альбумина. Как и в случае метода распыления капель, для оценки объема раствора были использованы частицы латекса.[ ...]
Вернуться к оглавлению