При оценке растительного материала в селекции часто определяют не количество белкового вещества растений, а содержание так называемого «сырого протеина», в этом случае не проводят осаждения белка, а весь найденный общий азот считают белковым. Без осаждения белкового азота при сжигании в серной кислоте связываются и другие азотистые соединения растений, так называемый свободный азот. Результат получается несколько завышенный, но для оценки и браковки селекционного материала этот способ вполне приемлем.[ ...]
Для определения общего азота чаще всего применяют микрометод Кьельдаля, который основан на минерализации навески анализируемого вещества в концентрированной серной кислоте, при этом выделяющийся аммиак связывается ею, а затем отгоняется щелочью. По количеству выделившегося аммиака вычисляют содержание азота и пересчитывают его на содержание сырого протеина.[ ...]
Ход анализа. Взятие навески. Из тщательно перемешанного образца размолотого зерна на аналитических весах берут две навески по 0,2 г (с точностью до 0,0001 г). Одну навеску отбирают в предварительно высушенный и взвешенный бюкс для определения влажности путем высушивания в сушильном шкафу при температуре 130 °С в течение 40 мин, другую взвешивают в специально приспособленной пробирке. После взвешивания пробирку с навеской вставляют возможно глубже в колбу Кьельдаля объемом 50—100 мл и, не допуская распыления размолотого зерна по стенкам шейки колбы, высыпают навеску в колбу, а затем взвешивают пустую пробирку. По разности между результатами первого п второго взвешиваний определяют величину взятой навески размолотого зерна.[ ...]
Сжигание. В колбу с навеской осторожно с помощью автоматической бюретки или мерного цилиндра приливают 5 мл концентрированной Н2804 и добавляют 0,2 г селенового катализатора. Содержимое колбы аккуратно перемешивают, следя за тем, чтобы вся навеска была смочена серной кислотой, закрывают полой стеклянной пробкой и помещают в устройство для сжигания (обязательно в вытяжном шкафу!), где при слабом кипячении сжигание проводят до полного обесцвечивания раствора.[ ...]
Колба должна находиться в наклонном положении. Нагревание ведут вначале осторожно, следят, чтобы пена не поднималась к горлышку и чтобы на стенках колбы не было черных несгоревших частиц, их смывают, осторожно взбалтывая содержимое колбы, а если это не удается, приливают немного серной кислоты. После появления белых паров с сернистым газом нагревание усиливают, но не допускают бурного кипения, так как при очень быстром озолеиии и высоких температурах возможны потери азота в аммиачной и молекулярной форме.[ ...]
Отгон аммиака проводят в аппарате Кьельдаля, модернизированном для микроопределений (рис. 41). Аппарат состоит из парообразователя, отгонной колбы, холодильника и приемника (конический стакан или колба). До дна отгонной колбы проходит трубка ■с несколько изогнутым вниз концом, через которую с помощью имеющейся на приборе воронки с краном вливается щелочь.[ ...]
Титрование. Остаток борной кислоты, не связанный отогнанным аммиаком, оттитровывают 0,01 н. Н О до обесцвечивания розового раствора при использовании индикатора Конвея или до изменения зеленой окраски в красно-фиолетовую при использовании индикатора Гроака.[ ...]
Для вычисления содержания сырого протеина полученный процент азота умножают на коэффициент, который различается по культурам в зависимости от содержания азота в белке (табл. 16).[ ...]
Задание. Определить содержание сырого протеина в исследуемых образцах пшеницы, ржи и других культур.[ ...]
Вернуться к оглавлению