Количественное определение хроматографически разделенных веществ может быть выполнено двумя способами: удалением вещества с адсорбента с последующим количественным его определением; количественным определением непосредственно на слое сорбента. Второй способ более чувствительный.[ ...]
Спектрофотометрпческие измерения выполняются при длинах волн максимума поглощения для данного вещества. Это дает возможность прямо измерять электронный спектр.[ ...]
Спектрофотометр для хроматограмм в тонком слое сконструировал Цейс совместно с Шталем и Джорком. Детальное описание прибора читатель сможет найти в работах [60, 61 ]. Конструкцией прибора предусмотрено поглощение постоянно излучаемой энергии либо фактического излучения от вещества. Так, оценка разделенных пятен или зон на тонкослойных пластинках может быть сделана измерением проходящего или отраженного света, а в случае флуоресцирующих веществ— измерением флуоресценции, причем чем больше количество вещества в пятне, тем меньше степень отражения. С целью уменьшения помех со стороны внешних факторов на той же самой пластинке во время хроматографического опыта наряду с образцом испытывается стандартное вещество. По показаниям степени отражения строят соответствующие калибровочные кривые.[ ...]
Измерения по методу отражения были тщательно исследованы в работе [62].[ ...]
Рассмотрим два типа измерения: по методу отражения и по методу пропускания.[ ...]
Метод отражения. Тонкослойные пластинки помещаются горизонтально на механическую подставку, которая должна двигаться с постоянной скоростью в направлении ординат с помощью сервомотора. Это необходимо для локализации пятен на пластинке. Свет с предварительно выбранной длиной волны, проходящий через монохроматор, попадает на слой сорбента вертикально, а цель четко фиксируется на пластинке с помощью системы линз. Излучение проникает з слой, который частично насыщен хроматографируемым веществом. При этом измеряется излучение, которое не поглощается, а рассеивается, достигая фотоумножителе пг д углом 45е. При таком расположении носители пластинок не влияют на измеречи:;. так что они могут быть сделаны из стекла, металла или пластического материала.[ ...]
Метод пропускания. Для измерения величины пропускания фотоумножитель должен быть удален от отражательного блока и закреплен в направлении оптической оси непосредственно под механической подставкой. Этот метод удобен для исследования хроматограмм на бумаге. Количественные определения могут выполняться при длинах волн, соответствующих максимуму поглощения вещества.’ Рассмотрим случай, когда два химически сходных вещества не обнаруживаются непосредственно на белых слоях силикагеля и становятся видимыми при спрыски ваиии обычными реагентами, но при этом дают совершенно одинаковую окраску’. " ЕсЛи эти вещества измерять денситометрически, они будут определяться при неполном разделении на пластинке, и одно из них может быть принято за другое. Последнее усугубляется, если они еще продвигаются при развитии хромате-’ граммы вплотную друг за другом.[ ...]
В случае спектрофотометрического измерения при определенной длине волнбг одно йзвеществ может быть определено отдельно от другого; дополнительнее измерение при иной длине волны дает содержание другого вещества путем простого вычитания [64].[ ...]
Следовательно, этот метод можно с успехом использовать для санитарно-химического анализа — для определения количеств всех веществ, разделенных на тонкослойных пластинках, которые поглощают ультрафиолетовый свет, после’ построения соответствующих калибровочных кривых. Чувствительность вышерассмотренного метода в 10 раз больше, чем чувствительность метода элюирования. Этот метод также намного быстрее. Качественные характеристики хроматографически разделенных зон могут быть получены путем регистрации кривых поглощения или флуоресценции непосредственно с тонкослойных пластин на спектрофотометре для хроматограмм.[ ...]
Вернуться к оглавлению