Количественную оценку разделенных соединений проводят непосредственно на слое адсорбента или после их вымывания из слоя.[ ...]
На результаты количественного определения большое влияние оказывает техника нанесения пробы на тонкий слой адсорбента, которая выполняется с помощью микрошприца или калиброванной микропипетки с оттянутым концом. Одной из причин ошибок является втягивание пробы обратно в кончик иглы шприца [388]. Для нанесения пробы на пластинку необходимо использовать по возможности иглу с тонким концом, а также смазывать ее силиконом.[ ...]
Ошибка зависит и от природы адсорбента. Так, для силикагеля? она может составлять 6,8%, для полиэтиленаминцеллю-лозы—13,7% [388]. При нанесении пробы важно не нарушить слоя адсорбента, так как это приводит к искажению формы пятна. При этом элюирование важно проводить в одинаковых условиях и одним и тем же растворителем, чтобы избежать незначительных изменений условий, которые могут оказать влияние на результаты. Оптимальным растворителем для количественного определения считают однокомпонентный растворитель со значениями В) исследуемого соединения от 0,25 да 0,75.[ ...]
Вопросы теории количественной тонкослойной хроматографии освещены в монографиях [388—393, 400]. В 1954 г. Кирх-нер и др. первыми применили ТСХ для количественного анализа. Эти авторы показали, что тонкослойную хроматографию можно использовать как аналитический метод, и если условия анализа тщательно стандартизированы, то надежность метода достаточно велика.[ ...]
При количественном анализе методом денситометрии измеряют интенсивность окраски пятна. Метод включает сканирование хроматограммы в проходящем или отраженном свете, ¡который затем попадает в фотоумножитель. Разность в интенсивности падающего и проходящего или отраженного света в виде электрического сигнала регистрируется на графике. Высота пика является мерой интенсивности пятна. Соотношение между площадью пика и массой вещества в пятне получают, например, умножением высоты пика на его ширину, измеренную на половине высоты, или используя интегратор. При использовании денситометрии точность измерения площади пятка может составлять 2—5%.[ ...]
После извлечения исследуемых веществ с адсорбента можно проводить их количественный анализ другим методом, например, с помощью спектрофотометрии. Такие исследования могут проводиться также с целью идентификации анализируемых примесей или дальнейшего разделения веществ (газовая хроматография) для более детальной интерпретации состава гробы.[ ...]
Для спектрофотометрического анализа вещество вымывают соответствующим растворителем, добавляют, если нужно, окрашивающий реагент и проводят измерение. Ошибки определения вызываются главным образом загрязнением исследуемых ■Проб, растворителя и адсорбента, неполным извлечением анализируемых соединений. Так как примеси поглощают в основном в УФ-области спектра, определение исследуемых веществ лучше проводить в видимой части спектра. Пределы обнаружения исследуемых соединений с применением оптических методов детектирования зависят от ряда факторов, в том числе и от природы соединений, и изменяются в широких пределах. Так, при измерении флуоресценции минимально определяемые количества веществ составляют 0,05—10 мкг. Анализ сложной смеси может потребовать повторного разделения. В этом случае первой ступенью является грубое фракционирование соединений пробы с различными функциональными группами методом адсорбционной хроматографии в тонком слое. Затем разделенные зоны вещества, соскабливают, удаляют с адсорбента и разделяют методами газовой или высокоэффективной жидкостной хроматографии.[ ...]
При использовании инфракрасной спектроскопии зону вещества, подлежащую исследованию, соскабливают микрошпателем, помещают в канал иглы шприца над слоем порошка бромида калия и утрамбовывают. Бромид калия служит фильтром, задерживающим прохождение мелкого силикагеля через иглу. Стеклянный шприц вместимостью 1 мл заполняют ацетоном, соединяют с иглой и вещество элюируют по каплям на слой измельченного и высушенного порошка бромида калия массой 10 мг. Перед добавлением каждой капли растворителю дают полностью испариться. Для переведения адсорбированного вещества из силикагеля на бромид калия обычно достаточно 20 капель. Полученный порошок бромида калия с исследуемым веществом перемешивают микрошпателем и таб-летируют (диаметр 1,5 мм).[ ...]
Для получения масс-спектра исследуемого вещества десорбированный раствор вводят шприцем через прокладку непосредственно в устройство для ввода образца в масс-спектрометр. Сочетание ТСХ и масс-спектрометрии использовано при определении полициклических ароматических углеводородов, так как определение их только хроматографическими методами малоэффективно из-за мешающего влияния сопутствующих примесей. Способность ПАУ к сублимации делает перспективным их масс-спектрометрическое исследование после предварительного анализа на ТСХ-пластинках.[ ...]
Аналогичные главы в дргуих документах:
| См. далее:Количественный анализ в тонкослойной хроматографии |