Согласно распространенным представлениям о репликации мелких РНК-содержащих вирусов бактерий и животных, проникшая в клетку свободная вирусная РНК присоединяется к рибосоме (или рибосомам) и действует как матрица для синтеза вирусной РНК-полимеразы, поело чего образовавшаяся вирусная РНК-полимераза катализирует синтез одной или нескольких комплементарных антипараллельных цепей на матрице родительской РНК. Однако до сих пор не удалось продемонстрировать присоединение родительской вирусной РНК к рибосомам. Правда, было показано, что небольшая часть родительской РНК ВЖМТ, меченной заР, становилась устойчивой к рибонуклеазе вскоре после заражения [1041]. Количество такой РНК достигало максимума через 20 мин и затем очень быстро падало. Этот результат очень хорошо согласовывался с предположением о том, что на родительской цепи синтезируется комплементарная ей минус-цепь, после чего родительская РНК вытесняется из образовавшейся двухценочечной структуры новосинтезированной дочерней вирусной РНК. Однако уровень радиоактивности в этих опытах был очень низок, и устойчивая к рибонуклеазе радиоактивность не была никак охарактеризована. Более того, кажется вообще маловероятным, чтобы все процессы в инфицированных клетках происходили бы так четко «в фазе», как можно предполагать па основании этих опытов.[ ...]
Детальные исследования живого и фиксированного материалов с помощью фазово-контрастной микроскопии привели к заключению, что РНК ряда штаммов ВТМ синтезируется в ядре, а затем перемещается в цитоплазму [64]. Однако при изучении характера окраски ядра в клетках стеблевых волосков томата в разное время после заражения никаких цитологических изменений в ядре не отмечалось вплоть до 3-го или 4-го дня. С помощью дифференциальной окраски и микроспектрофотометрических методов удалось получить более точную информацию относительно изменений в ядрах клеток эпидермиса, инфицированных ВТМ [785]. Через 6— 8 ч после заражения в ядрах клеток эпидермиса нижней поверхности листа N. tabacum обнаруживалось кратковременное увеличение содержания РНК приблизительно на 20% (фиг. 25).[ ...]
Включение 3Н-урацила в здоровые клетки эпидермиса листьев табака и в клетки, инфицированные ВТМ, изучали с помощью микрорадиоавтографии и последующего счета зерен для оценки включения. При этом не было найдено различий во включении урацила в материал цитоплазмы, но в первые несколько дней после заражения в ядрах инфицированных клеток наблюдали приблизительно трехкратное усиление включения [1967].[ ...]
Однако такая локализация радиоактивности, устойчивой к актиноми-цииу D, наблюдалась не во всех случаях. Так, при инфицировании корней V. jaba вирусом крапчатости конских бобов повышение уровня включения, устойчивого к актиномиципу D, было обнаружено в цитоплазме (главным образом в эндоплазматической сети ж в аппарате Гольджи) [449]. Предварительные результаты такого рода были получены также для вируса кольцевой пятнистости томатов и вируса бронзовости томатов.[ ...]
График, представленный иа фиг. 26, очень напоминает соответствующий график на фиг. 25, хотя первый из них относится к общей клеточной РНК, второй — к ядерной. Эти результаты, полученные с помощью различных методов, будучи сопоставлены, должны, очевидно, означать, что синтез РНК в ядре примерно через 5—8 ч после заражения внезапно резко усиливается и что позднее новосинтезированиая РНК мигрирует в цитоплазму. Подобная картина согласуется, по-видимому, с цитологическими наблюдениями.[ ...]
Было обнаружено, что двухцепочечная РНК ВЖМТ локализуется во фракции хлоропластов из тканевых гомогенатов [1379]. В препаратах хло-ропластов в этом случае практически отсутствовали интактные ядра (для дезинтеграции ядер применялся концентрированный раствор соли); однако было высказано предположение, что эти препараты могли быть загрязнены примесью ядрышек [230]. При дальнейших попытках решить поставленную проблему выявилась хорошая корреляция между содержанием хлорофилла и содержанием двухцепочечной РНК в различных фракциях, тогда как для ДНК такой корреляции найдено не было (Ральф и Войчик, личное сообщение). Чтобы окончательно решить вопрос о локализации двухцепочечной РНК, необходимы повторные исследования с фракционированием клеточных субструктур и их электронно-микроскопическим изучением. Это позволит получить реальную оценку содержания органелл (и,ли фрагментов органелл) в различных фракциях.[ ...]
Вернуться к оглавлению