Обычно для исследований используются листовые пластинки. У большинства растений, применяемых в такого рода опытах, от 50 до 70% всей свежей массы приходится на долю листьев, причем конечная концентрация вируса в листе часто оказывается в 10—20 раз выше, чем в других частях растения. Различают четыре типа систем, используемых для исследования: 1) интактиые растения, 2) переживающие ткани, 3) клетки или органы в культуре и 4) бесклеточные системы. Преимущества и трудности работы с каждой из этих систем обсуждаются ниже. Некоторые вирусы растений реплицируются в организме насекомых, которые являются их переносчиками. Этот вопрос обсуждается в гл. XVI.[ ...]
В гл. II мы говорили о различиях между отдельными растениями, проявляющихся при любом способе подбора растений для опыта. Нужно, однако, иметь в виду, что, хотя эти трудности и существуют, некоторые аспекты процесса репликации вирусов могут быть изучены только на интактиых, развивающихся растениях. Липш на них можно, например, проследить зависимость между репликацией вируса и появлением симптомов мозаики.[ ...]
Верхний предел числа клеток эпидермиса, которые могут быть инфицированы при механической инокуляции в оптимальных условиях, точно не известен, но вряд ли он превышает 104 клеток на лист. Поэтому в начале эксперимента в такой системе инфицируется не более одной на каждые 10а клеток. При этом даже у первично иицифироваппых клеток синхронность инфекции, очевидно, не слишком велика, особенно если для инокуляции используется интактный вирус. Таким образом, ранние изменения в небольшой части инфицированных клеток должны, вероятно, оставаться невыявлен-нымя из-за огромного числа иещхфицированных клеток. Позже, с распространением инфекции, образуется смешанная клеточная популяция, т. е. популяция, у которой в разных клетках протекают различные стадии инфекционного процесса.[ ...]
Еще одна трудность возникает при постановке экспериментов, в которых в качестве ипокулума используется вирус, меченный радиоактивными изотопами. Большая часть вируса, нанесенного на лист, не инфицирует клетки; в то же время значительная (непостоянная но величине) часть вируса не может быть отмыта с листа после инокуляции. Исследование дальнейший судьбы инфекционных частиц сильно затрудняется из-за массы такого балластного «неэффективного» ипокулума, остающегося на листе.[ ...]
Для некоторых экспериментов могут оказаться полезными- следующие две модификации метода инокуляции листьев. У листьев, выросших при определенных условиях, иногда удается относительно легко отделить участки эпидермиса. Правда, таким путем можно получить весьма ограниченное количество ткани, по этот прием позволяет увеличить приблизительно в 8 раз число клеток, инфицируемых вскоре после инокуляции. В сочетании с современными микроаналитическими методами это дает возможность получить ценные данные [571]. Некоторые авторы применяли микромаиинуляциопные методы для заражения единичных клеток листа (обычно это были клетки листовых волосков) и затем следили за изменениями, происходящими непосредственно в живых клетках, либо с помощью фазового контраста или ультрафиолетовой микроскопии, либо пользуясь препаратами, окрашенными флуоресцирующими антителами. Этот способ позволяет получать цегтнуго информацию, но применение его ограничивается микроскопическими наблюдениями; для биохимических исследований он непригоден.[ ...]
Перемещаясь из ипокулированпого листа, вирус может проникать вначале в самые молодые листья, а затем последовательно во все более и более старые. Таким образом, при системной инфекции стадии инфекционного процесса в разных листьях могут быть совершенно различными. Солее того, время распространения инфицирующего материала от ипокулироиашшх листьев к молодым может у разных растений очень сильно варьировать. Вполне вероятно, однако, что в молодых, системно инфицируемых листьях ■(у табака или китайской капусты опи будут иметь в длину около 4 см) большая часть клеток заражается в течение 1—2 дней. Такие листья могут с мак-■сималышм доступным нам приближением представлять ткань, в которой большая часть клеток начинает продуцировать вирус приблизительно в одно и то же время.[ ...]
Представители этого семейства — небольшие водные растения — во многих отношениях удобны] для биохимических и физиологических исследований [779]. Их можно выращивать в культуре при контролируемых условиях на средах известного состава. Показано, что БрьгоАеЫ ро1угЫш (Ь.) ЗЫе1<1. инфицируется вирусом табачной мозаики и Х-вирусом картофеля [1018,1019]. Возможно, эти растения удастся в будущем использовать в качестве системы, пригодной для изучения определенных аспектов репликации вирусов.[ ...]
Вернуться к оглавлению