Центрифугирование при высокой скорости в течение достаточного периода времени приводит к осаждению вируса. Если при этом вирус не денатурирует, то его можно затем перевести в активной форме обратно в раствор. Этот этап выделения очень важен, так как он преследует сразу две цели. Во-первых, при этом происходит концентрирование вируса, а во-вторых, препарат вируса освобождается от низкомолекулярных примесей. Не следует применять при центрифугировании растворы вирусов в низкой концентрации, так как это приводит к значительным потерям (фиг. 3).[ ...]
Этот метод широко применялся еще до того, как в распоряжении исследователей появилась высокоскоростная центрифуга. До сих пор он остается цепным для вирусов, которые не инактивируются в концентрированных солевых растворах. Наиболее часто для высаливания применяют сульфат аммония в концентрации, составляющей около 1!3 насыщающей, хотя другие соли также могут осаждать вирус и кристаллизовать его (фото 3). После выдерживания в течение нескольких часов или дней препарат вируса осаждают путем низкоскоростного центрифугирования и вновь растворяют в небольшом объеме соответствующей среды.[ ...]
Многие белки имеют низкую растворимость в изоэлектрической точке или вблизи нее (фиг. 61, В). Изоэлектрическое осаждение может применяться для вирусов, которые стабильны при таких условиях. После центрифугирования или фильтрования осадок собирают и вновь растворяют в подходящей среде.[ ...]
С помощью гель-фильтрации на сефадексе, агаре или агарозе из раствора вируса удаляют примеси небольших молекул. Экстракт наслаивается на вершину колонки гранулированного геля, уравновешенного соответствующей средой. Частицы вируса, не проникая внутрь гранул геля, будут двигаться через колонку быстрее, чем низкомолекулярные вещества, которые могут проникать в гранулы. Гель-фильтрацию обычно используют ка последнем этапе очистки вируса. Этот метод удобен также для некоторых вирусов, которые должны быть быстро удалены из первичного осветленного экстракта, так как обеспечивает замену растворителя, в котором находится вирус. Колонка с сефадексом С-100 диаметром 5 см и длиной 50 см обладает достаточной емкостью для нанесения 200 мл осветленного экстракта [1671].[ ...]
Для удаления низкомолекулярных веществ из первичного экстракта или для смены среды можно провести диализ через целлюлозные мембраны. Этот метод более длителен, чем фильтрование через гель, и чаще применяется для удаления соли после высаливания и кристаллизации, а также после фракционирования в градиенте плотности солей или сахарозы, что обсуждается ниже.[ ...]
При сравнительном исследовании двухфазной системы, содержащей полиэтилелгликоль и декстрансульфат, и однофазной системы из поли-этиленгликоля в присутствии соли Леберман [1055] показал, что простая процедура осаждения вируса с помощью полиэтиленгликоля так же эффективна, как и выделение вируса с помощью двухфазной системы. Эти методы требуют дальнейшей разработки с использованием ряда вирусов. Их, вероятно, можно рассматривать как полезный этап на пути первичного концентрирования вируса из осветленного клеточного экстракта.[ ...]
Венекамп и Мош [1842] описали метод выделения некоторых вирусов с помощью колонки с порошком целлюлозы, смешанным с полиэтиленглико-лем, декстраном, глюкозой и солями. Сходную смесь добавляли к экстрактам листьев и экстракт паносили на колонку. Вирус при этом осаждался и задерживался на колонке, в то время как большая часть веществ, характерных для клеток растения-хозяина, проходила сквозь нее. Вирус элюировали с колонки средой без полиэтиленгликоля и хлористого натрия. Однако сомнительно, чтобы с помощью одного лишь этого метода удавалось получать вирусные препараты, свободные от материала растения-хозяина.[ ...]
Вернуться к оглавлению