В неочищенном экстракте вирус смешивается с различными клеточными компонентами, размеры которых колеблются в тех же широких пределах, что ж размеры вируса, и свойства которых в некоторых отношениях напоминают свойства вируса. К этой категории частиц относятся рибосомы, 19в-болок хлоропластов (фракция I), имеющий тенденцию образовывать агрегаты, фитоферритин [407], фрагменты мембран и фрагменты разрушенных хлоропластов. В этой смеси присутствуют также неразрушенные клетки, растворимые белки и вещества с низкой молекулярной массой.[ ...]
При этом осаждается клеточный детрит и коагулируемый материал клеток хозяина. В результате центрифугирования экстракт, обработанный м-бута-нол — хлороформом, разделяется на две фазы, причем вирус остается в водной фазе, а основная часть денатурированного материала находится в интерфазе. Следует заметить, что, хотя некоторые вирусы устойчивы к обработке м-бутаиол — хлороформом, у других она может вызвать довольно серьезные потери. Обработка одним лишь хлороформом является более мягким приемом, чем обработка смосыо бутанол — хлороформ. Для некоторых вирусов эмульгирование экстракта из листьев с фторуглеродом (фреон-113) дает хорошее первоначальное осветление без серьезной потери инфекционное™ [423].[ ...]
Иногда вместо центрифугирования для первичного удаления загрязняющего экстракт материала клеток растения-хозяина применяют фильтрование через фильтры из бумаги и тому подобных материалов. Для многих вирусов, вероятно, очень важно проводить их выделение как можно быстрее после получения экстракта из листьев. Однако Боудэн и Пири [124] описали •систему из листьев табака, инактивирующую вирус. Когда вирус осаждали из свежеотжатого сока, то инактивирующая система осаждалась вместе с вирусом. В ресуспендированном осадке инактивирующая система была стабильна и инактивировала вирус некроза табака и вирус кольцевой пятнистости табака (но не ВТМ). В экстракте из листьев, хранившихся при 18 °С в течение дня, инактивирующая система разрушалась, в связи с чем из таких экстрактов путем осаждения можно было получить гораздо более стабильные препараты вируса.[ ...]
В клетке некоторые вирусы существуют в виде окруженных мембранами агрегатов (фото 54). Поэтому требуется время для высвобождения вируса после получения экстракта из листьев. Если проводить центрифугирование вскоре после экстрагирования, то даже при низкой скорости большая часть вируса будет потеряна с первым же осадком.[ ...]
Вернуться к оглавлению