Так, Франки [546] показал, что экстракты листьев огурца при смешивании с очищенным вирусом огуречной мозаики снижают инфекционность этого вируса в 100 раз. В присутствии ингибирующих веществ происходит осаждение вируса.[ ...]
Соответствующее растение, условия, в которых оно выращивается, а также время, когда растение можно использовать для выделения вируса, следует выбирать так, чтобы исходная концентрация инфекционных вирусных частиц была как можно выше. Для многих вирусов их концентрация достигает максимума через несколько дней или недель и затем довольно быстро падает (фиг. 31). Иногда распределение вируса в растении столь неравномерно, что имеет смысл использовать для выделения лишь те его части, которые содержат вирус в высокой концентрации. Нередко содержание вируса оказывается более низким в средней жилке, чем в листовой пластинке. Если средняя жилка и черешок велики по размеру, то их полезно удалить. В отдельных случаях отделение определенной ткани является почти обязательным приемом. Например, в случае выделения вируса раневых опухолей это необходимо, так как вирус накапливается только в опухолевой ткани.[ ...]
Другая причина, заставляющая использовать для выделения вируса лишь определенные части инфицированного растения, состоит в том, чтобы избежать накопления высоких концентраций ингибиторов, а также веществ, которые могли бы адсорбироваться иа вирусе; такие вещества крайне трудно удалять. В молодых растениях содержание таких веществ часто бывает низким, и поэтому вирусы в некоторых случаях можно выделять только из такой ткани.[ ...]
Следует всегда иметь в виду возможность того, что растение-хозяии, используемое для накопления вируса, еще раньше было заражено другим вирусом или может быть инфицировано в процессе культивирования. Нередко загрязнение материала нежелательным вирусом происходит в процессе выращивания растений в теплице. Так, штаммы вируса табачной мозаики, Z-вируса картофеля и вируса некроза табака могут преобладать в теплицах, которые в течение некоторого времени использовались для работы с этими вирусами. В этом случае для выделения примеси не всегда достаточно использовать растения, реагирующие на заражение балластным вирусом лишь образованием местных поражений (например, N. glutinosa — для удаления примеси ВТМ). Даже при незначительном количестве такого стабильного вируса его концентрация при выделении основного вируса может сильно возрастать.[ ...]
Замораживание растительной ткани перед экстракцией вируса облегчает последующее удаление компонентов клетки-хозяина, и этот прием полезно применять при выделении таких стабильных вирусов, как ВТМ. Однако для многих других вирусов замораживание оказывается вредным. Инфицированные насекомые-переносчики (тли) недавно были использованы как исходный материал для выделения небольших количеств вируса скручивания листьев картофеля [1324].[ ...]
Такая среда, как, например, сыворотка, является естественной средой для большинства вирусов животных. Аналогичная среда отсутствует в случае вирусов растений. Поело разрушения растительных клеток и освобождения, а также смешивания их содержимого вирусные частицы попадают в необычную для них среду. Поэтому для выделения вирусов обычно используется искусственная среда, предназначенная для сохранения вирусных частиц в инфекционном, интактном и пеагрегировапном состоянии на различных стадиях очистки. Условия, благоприятствующие сохранению стабильности ■очищенного вирусного препарата, вероятно, отличаются от условий, которые необходимы для получения неочищенного экстракта или частично очищенных вирусных препаратов [263, 264]. Кроме того, различные факторы могут сильно воздействовать друг па друга, оказывая таким образом влияние на стабильность вируса. Ниже мы рассмотрим основные факторы, которые необходимо принимать во внимание при выборе подходящей среды для выделения вируса.[ ...]
Многие вирусы стабильны в довольно узком диапазоне значений pH, и при выделении вируса pH экстракта не должен выходить за эти пределы. Важное значение может иметь выбор подходящего буфера, а также соответствующая ионная сила. Часто применяют фосфатные буферы, но на некоторые вирусы они оказывают вредное влияние. Например, при использовании фосфатного буфера не удается получить инфекционный препарат вируса мозаики салата-латука, тогда как дри использовании боратного буфера могут быть выделены высокоинфекционные препараты [780]. Применявшийся в этой работе боратный буфер имел незначительную емкость.[ ...]
Вернуться к оглавлению