Вирусы растений имеют такие размеры, которые делают очень удобным их анализ с помощью аналитического ультрацентрифугирования. Этот метод особенно полезен для контроля этапов очистки вируса, а также для изучения влияния различных обработок на физическое состояние вирусных частиц и определения количества вируса в неочищенном экстракте ткани. При использовании шлирен-оптики обычно можно обнаружить вирус в концентрации около 100 мкг на 1 мл. Иногда удается работать с вирусом даже при концентрации 50 мкг на 1 мл. Верхний предел концентрации отчасти зависит от вируса, а также от скорости центрифугирования. При концентрации вируса, составляющей 3—4 мг/мл, возможно зашкаливание, так что появляется черная линия, пересекающая пик. Оптимальными являются условия, при которых концентрация каждого компонента находится в пределах 0,5—2 мг/мл.[ ...]
При измерении поглощения в ультрафиолете нижний предел концентрации должен составлять около 5 мкг/мл для вирусов с высоким содержанием РНК и 20 мкг/мл для вирусов с низким содержанием РНК. Естественно, что при изучении нуклеиновых кислот или нуклеонротеидов ультрафиолетовая оптика оказывается намного более чувствительной, чем шлиреи-система (фото 1) х.[ ...]
С помощью интерференционного микроскопа можно очень точно определить количество вируса, но этот метод мало применяется при изучении вирусов растений, главным образом потому, что для получения хороших результатов необходимы высокие концентрации вируса (5—10 мг/мл).[ ...]
При работе с неочищенными экстрактами, содержащими большое количество низкомолекуляриых веществ, поглощающих в ультрафиолете, лучше использовать шлирен-систему, а не ультрафиолетовую оптику.[ ...]
Ультрафиолетовую оптику можно с успехом применять для исследования очищенных вирусных препаратов. В этом случае требуется меньшее количество материала и можно обнаружить минорные вирусные компоненты или примеси, ие выявляемые с помощью шлирен-оптики. Для того чтобы перевести площадь пика, измеренную на шлирен-диаграмме, в концентрацию вируса (в мг на 1 мл), необходимо определить коэффициент пересчета площади в концентрацию, используя для этого хорошо очищенный препарат вируса известной концентрации. Проблемы, связанные с калибровкой, при определении абсолютной концентрации вируса с помощью ультрафиолетовой оптики значительно более сложны.[ ...]
Вернуться к оглавлению