Существенную роль при разделении веществ методом ТСХ играет количество наносимого соединения или смеси. При нанесении больших количеств (свыше 10 мкл) вещества часто получаются большие и вытянутые пятна, в результате чего разделения достичь не удается. Пробы веществ обычно от 0,1 до 50 мкг наносят на пластинку в виде растворов в летучих растворителях: хлороформе, эфире, гексане и др. Для этого пользуются микропипеткой, микрошприцем или капилляром. Диаметр пятна не должен превышать 10 мм.[ ...]
Пробы наносят на стартовую линию на расстоянии 1.5 см от края пластинки, осторожно прикасаясь концом пипетки или капилляра, чтобы слой сорбента при этом не нарушался. Расстояние между отдельными пробами должно быть не менее 1 см.[ ...]
В зависимости от того, в каком направлении поступает растворитель на пластинку, различают методы восходящей, нисходящей и горизонтальной хроматографии.[ ...]
Восходящая хроматография — растворитель поднимается по пластинке под действием капиллярных сил. Процесс проводят в стеклянных сосудах (камерах) любой формы с плоским дном (например, кристаллизаторе). Размер камеры должен быть несколько больше, чем размер пластинки. В камеру наливают растворитель или емесъ растворителей в таком количестве, чтобы поставленная вертикально пластинка погружалась в него не более чем на 0.5 см. Сверху камеру закрывают пришлифованной крышкой или стеклом. После подъема растворителя на 10 см (пластинки 9X12 см) пластинку переносят па несколько минут в вытяжной шкаф для испарения растворителя. При использовании пластинки с незакрепленным слоем сорбента пластинку опускают в растворитель под утлом в 10—15е. При этом длина пробега жидкости не влияет на /?. и можно пользоваться пластинками длиной 40—50 см.[ ...]
Горизонтальная хроматография — пластинка в камере распо-ложена горизонтально.[ ...]
На практике наиболее часто пользуются способом восходящей хроматографии.[ ...]
Повторное хроматографирование в разных системах растворителей называют ступенчатой хроматографией, ее используют в том случае, когда вещества смеси плохо разделяют в одной системе растворителей.[ ...]
Применяют также двумерную хроматографию. В этом случае повторное разделение проводят в направлении, перпендикулярном первоначальному. При этом пластинку с нанесенной пробой хроматографируют сначала обычным способом. Затем после подсушивания пластинку поворачивают под углом 90° и проводят анализ с другой подвижной фазой. Двумерную хроматограмму применяют для разделения многокомпонентных смесей.[ ...]
Вернуться к оглавлению