Количественное определение в зонах путем измерения площади зон описаш) в работе Ферберна [12]. При всей надежности результатов этот метод достаточно трудоемок. Шеллард и Элам для ряда веществ предложили ТСХ — систему, в которой конечные зоны были красного цвета на белом фоне, что весьма удобно для денситометрии [13]. Благодаря этой системе удалось применить разработанные принципы к хроматографии в тонком слое.[ ...]
Выше обсуждались условия, обеспечивающие получение одинаковых конечных зон в хроматографическом эксперименте. При денситометрическом определении содержания вещества в зоне ошибки минимальны при соблюдении следующих требований.[ ...]
Подготовка бумаги. Бумагу необходимо хранить так, чтобы на нее не попадала пыль (в упакованных пачках). Кроме того, параметры бумаги следует в течение ночи привести в равновесие с атмосферой камеры. Необходимый для нанесения объем раствора следует отмеривать с помощью специального устройства, а полученные пятна в соответствии с ранее рассмотренными работами Буша и Консдена следует подсушивать в токе холодного воздуха [14].[ ...]
Процесс развития хроматограмм. Камеру погружали в большую водяную баню с постоянной температурой. Во всех экспериментах использовали критический объем растворителя около 1%. Хроматограммы развивали нисходящим способом, а начальные пятна наносили на расстоянии приблизительно 11 см от верхней кромки бумаги. Этого пространства вполне достаточно для погружения конца бумажного листа в лоток с растворителем и для того, чтобы к моменту достижения линии старта скорость протекания подвижной фазы стала равномерной. Процесс развития хроматограмм ауш до тех пор, пока фронт растворителя не достигал одного или двух отверстий, вШптамлбВаяныХ 6 бумаге для удобства наблюдения и расположенных на определенном, заранее обусловленном расстояний ОТ ЛШЙ)Й старта. По окончании процесса развития бумагу извлекали из камеры и быстро высушивали в токе теплого воздуха для того, чтобы с максимально возможной скоростью установить места локализации конечных зон на хроматограмме.[ ...]
В ряде случаев было найдено, что процесс проявления хроматограмм лучше проводить путем опрыскивания бумаги с обеих сторон, поскольку при проявлении погружением бумаги в раствор реагента на ее поверхности сорбировалась пленка, вызывая появление черных пятен. Однако в большинстве случаев при появлении хроматограмм можно предпочесть процесс погружения. После опрыскивания хроматограмму высушивают в токе холодного воздуха.[ ...]
Денситометрия. Основной проблемой денситометрии является то, что окраска фона, возникающая вследствие избытка проявляющего реагента на бумаге, может маскировать зоны определяемых компонентов. Для этого применяют светофильтры, однако при их использовании фон почти всегда дает сигнал на самописец. Уровень фона зависит от количества проявляющего реагента на хроматограмме. Его окраска может изменяться вследствие окисления на воздухе и выцветания. Избежать этого можно путем начала денситометрического измерения точно через 1 ч после проявления хроматограмм. Если же измерения не проводят, то хроматограммы сохраняют непроявленными, при этом между ними прокладывают листы фильтро-вальной бумаги и хранят их в темноте.[ ...]
Вернуться к оглавлению