Анализируемую пробу в виде раствора наносят на пластинку для ТСХ с помощью платино-иридиевых капилляров, микропипеток или микрошприцев. Проба (2—10 мкл раствора в летучем растворителе) наносится в виде пятна или полосы на расстоянии 1,5 см от края пластинки. Растворитель должен быть неполярным, чтобы уменьшить размывание пятна на точке старта. Он также должен быть низкокипящим, так как до начала проявления пластинки должен испариться с нее. Пластинку с нанесенными пробами помещают в камеру (рис. 11.42), дно которой покрыто растворителем: под действием капиллярных сил пары растворителя перемещаются по слою адсорбента. При этом компоненты исследуемой смеси продвигаются через слой с различными скоростями, а после проявления извлекают пластинку из камеры и испаряют подвижную фазу (растворитель) [2, 3].[ ...]
На воспроизводимость значений влияют качество и активность адсорбента, чистота растворителя и насыщение его паров в камере (см. рис. 11.42), температура окружающего воздуха, глубина слоя подвижной фазы и ее скорость, размер пробы, а также точность измерения центра пятна [2, 7].[ ...]
Разрешение в ТСХ зависит от коэффициента распределения, селективности и эффективности хроматографической системы (сравните с аналогичными факторами в газовой хроматографии, глава I). Аналитик стремится всегда к наиболее полному разделению пятен (веществ) на хроматограмме. При этом разрешение двух зон считается полным при Я > 1,5. Для максимального разрешения оптимальным считается значение = 0,3—0,5.[ ...]
Растворители для ТСХ должны обеспечивать низкие значения полностью растворять все компоненты пробы, быть относительно летучими и хорошо смачивать слой адсорбента на пластинке. В качестве растворителей чаще всего применяют петролейный эфир, этанол, метанол, ацетон, ацетонитрил или их смеси с водой.[ ...]
Рисунки к данной главе:
Процессы переноса элюента при ТСХ в нормальной хроматографической камере [7] |
ТСХ смеси ДНФ-аминокислот на пластинах с силикагелем с диаметром зерна |