Обнаружение холерного вибриона в воде осуществляется в основном методом обогащения с обязательным выделением чистых культур возбудителя и их идентификацией.[ ...]
Доставленную пробу воды в объеме не менее 900 мл (доведенной до pH = 7,6— 7,8- насыщенным раствором соды) засевают в колбу Эрленмейера с 100 мл основного раствора пептона1. Тот же объем исследуемой воды можно разделить на две части (по 450 мл) и засеять в. колбы с 50 мл основного раствора пептона.Наиболее целесообразно указанное количество воды дробить на небольшие объемы и засевать по 90 мл ее в широкогорлые флаконы, содержащие по 10 мл основного раствора пептона. На этой среде вибрионы быстро размножаются и уже через несколько часов скопляются почти в чистой культуре на поверхности жидкости, образуя нежную пленку.[ ...]
Флаконы с засеянной водой помещают в термостат при 37°С на 8—24 часа для выращивания посева.[ ...]
После 5—6-часовой инкубации с поверхности засеянной среды (из каждого флакойа) отбирают несколько петель жидкости вместе с пленкой и засевают ее нд поверхность щелочного мясо-пептонного’агара (pH = 8,5) в чашке Петри. На каждый флакон необходимо брать не менее двух чашек с агаром. Посевы на чашках выдерживают в термостате при 37°С в течение 8—10 часов.[ ...]
Агглютинацию с засеянной пептонной средой помещают в термостат при 37°С на 8—10 часов, после чего учитывают результат реакции. Наличие агглютинации в титре не ниже 1 : 800 позволяет дать предварительный положительный ответ на наличие холерного вибриона в исследуемой воде.[ ...]
Наряду с пересевом .на чашки и постановкой .реакции агглютинации из поверхностного слоя засеянной пептонной среды готовят мазок (окрашивают вод-, ным фуксином) и висячую каплю, которые исследуют микроскопически.[ ...]
После пересева на чашки с щелочным агаром и постановки реакции агглютинации флаконы с засеянной средой не. уничтожают, а вновь помещают в термостат до истечения 24-часовой инкубации (могут понадобиться для дальнейшего исследования).[ ...]
Через 8—10 часов роста посева на щелочном агаре (см. выше) производят изучение подозрительных колоний. Внимание обращают на небольшие круглые прозрачные- с ровными краями колонии, слегка опалесцирующие в проходящем свете голубоватым цветом. Из таких колоний готовят мазки (окрашивают фуксином) -и проверяют их серологические свойства — пробная агглютинация на стекле. Изученные колонии отвивают на косой агар. Посевы на косом агаре помещают в термостат при 37° С на 8—10 часов. Затем проверяют чистоту выделенной культуры и подвергают окончательной идентификации.[ ...]
Для окончательной идентификации выделенную культуру с косого агара пересевают в 1% пептонную воду (нитрозо-индоловая проба), на желатину (опре-деленйе п ротео л и ти чес кой способности), на среды пестрого ряда (определение ферментативной активности) и на среду с кровью (определение гемолитической способности). Наряду с этим с той же культурой ставят пробу с. холерным бактериофагом и развернутую реакцию агглютинации.[ ...]
Нйтрозо-индоловую пробу ставят с 18—24-часовой культурой на 1% пептонной воде, добавляя к ней несколько капель крепкой серной кислоты и небольшое количество 0,01% раствора азотисто-кислого натрия. При наличии индола появляется кольцо розового Цвета. Истинные холерные вибрионы образуют индол.[ ...]
Вернуться к оглавлению