Методы непосредственного обнаружения патогенных микробов .кишечной группы в воде требуют значительного времени и не всегда оказываются достаточно эффективными. Иногда поэтому возникает необходимость использовать и косвенные методы обнаружения тифозно-паратифозных й дизентерийных бактерий в воде. К числу таких методов" относится метод агглютинации микробных ассоциаций, разработанный А. Ф. Стояновским и сотрудниками (1955—1957 гг.).[ ...]
Антиген для постановки реакции агглютинации получают следующим образом: пробу воды, в зависимости от задачи исследования, засевают на--плотные элективные питательные среды—• фуксин-сульфитный агар, односахарный розоловый агар, бакто-агар Плоскирева или среду Левина.[ ...]
Мембранный фильтр после фильтрации накладывают в чашку на поверхность питательной среды и осадок с фильтра равномерно распределяют по всей ее поверхности стеклянным щпаделем. Далее, не обжигая шпаделя, рассевают его последовательно еще в 3—5 чашек с той же или другой питательной средой. Чашки с посевами помещают в термостат на сутки при 37°С. Параллельно делают посевы, которые выращивают 48 часов при температуре 45°С.[ ...]
Спустя 24—-48 часов просматривают посевы и отбирают чашки с хорошо выраженными отдельными колониями. Чашки с наличием сплошного роста для приготовления антигена не используются. Если в чашках, наряду с гладкими (Б) формами колоний, выросли отдельные шероховатые (И) формы, то от последних необходимо освободиться (удаляются путем снятия их петлей). После этого в чашку вносят 2—5 мл стерильного физиологического раствора и смывают все колонии. Смыв бактерий первоначально взятым объемом физиологического раствора (2—5 мл) производится последовательно из всех чашек, на которых обнаружены хорошо выраженные отдельные колонии Биформы. При этом взвесь бактерий переносят из одной чашки в другую при помощи стерильной пипетки. В случае, когда на чашках обнаруживается большое количество шероховатых форм колоний, взвесь из гладких форм готовят путем снятия их петлей в отдельной пробирке с 2—3 мл физиологического раствора.[ ...]
Содержимое всех пробирок тщательно перемешивается путем встряхивания штатива, после чего их помещают на 2 часа в термостат при 37°С. Затем штатив с пробирками вынимают из термостата и оставляют до следующего дня при комнатной температуре.[ ...]
Учет реакции производится при помощи лупы или агглютино-скопа. Просмотр пробирок начинают с контроля сыворотки и контроля антигена. Бывают случаи обнаружения спонтанной агглютинации в пробирке с контролем антигена. Это является показателем давнего фекального загрязнения воды. Если спонтанная агглютинация не обнаружена, то просмотр пробирок продолжают начиная с наименьшего разведения сыворотки и заканчивают наибольшим. Результаты реакции отмечаются в журнале анализов полюсами или минусами. Реакция агглютинации получается положительной при наличии в ассоциации бактерий представителей патогенной кишечной флоры или соответствующих им параштаммов. При этом титр агглютинации параштаммов обычно бывает сравнительно невысоким. В то же время патогенные бактерии кишечной группы, попавшие в водоем и еще не потерявшие свою агглютинабильность, дают реакцию в высоком титре.[ ...]
По результатам реакции, через 36—48 часов от начала анализа можно дать предварительный положительный или отрицательный ответ на наличие в исследуемой воде тифозно-паратифозных или дизентерийных бактерий.[ ...]
Метод агглютинации микробных ассоциаций, полученных путем смыва с плотной питательной среды всей массы выросших бактерий, рационален вследствие своей экспрессности как ориентировочный, имеющий сигнальное значение. Он позволяет обнаружить пробы воды, в которых содержатся патогенные бактерии, что облегчает дальнейшее углубленное бактериологическое изучение обследуемого водоисточника.[ ...]
Вернуться к оглавлению