Кислые полисахариды, содержащие карбоксильные группы, при определенных значениях pH могут давать отрицательно заряженные полианионы, способные передвигаться к аноду под действием приложенной к электродам разности потенциалов. Скорость движения полианионов к электроду зависит от заряда молекулы, ее формы и молекулярного веса, что позволяет разделять различные по составу и молекулярному весу полисахариды. Особенно часто метод электрофореза применяется для установления однородности полисахаридов.[ ...]
Нейтральные полисахариды также могут быть разделены электрофорезом в щелочном [32] или боратном буферных растворах.[ ...]
При высоких значениях pH гидроксильная группа может быть ионизирована в виде несущего заряд полианиона. В боратных буферных растворах полисахариды образуют отрицательно заряженный комплекс, который, как правило, должен двигаться к аноду. Однако при электрофорезе на твердых носителях (бумага, волокно, стеклянный порошок) при pH 9,3 возможно перемещение боратных I комплексов к катоду.[ ...]
Электрофоретическое разделение полисахаридов может быть осуществлено различными путями: под действием электрического тока в растворе (электрофорез с подвижной границей в ячейке Ти-зелиуса); на полосках бумаги, на листах бумаги из стеклянного волокна, на лентах из чистого отбеленного шелка, на колонках, заполненных стеклянным порошком (зонный электрофорез).[ ...]
Электрофоретическое разделение в ячейке Тизелиуса применяется для определения гомогенности полисахаридов и определения числа компонентов в смесях полисахаридов.[ ...]
В основу этого метода положено наблюдение за подвижной границей [33].[ ...]
Раствор полисахарида помещают в У-образную ячейку прибора для электрофореза, которая разделена плоскими шлифами на три секции таким образом, что ток жидкости через ее канал может быть прерван горизонтальным смещением центральной секции. При заполнении и монтировании ячейки раствор полисахарида помещают в нижнюю секцию. Одну часть центральной секции ячейки заполняют раствором полисахарида, а другую — буфером. Буфер помещают также в верхнюю секцию ячейки и в сосуды, соединенные с верхней секцией. При передвижении центральной секции в нормальное положение между раствором полисахарида и буфером образуется резкая граница. В ячейке поддерживают температуру 4° С, при которой плотность воды максимальная и конвекционные токи ничтожны. Смещение границы измеряют по фотографиям, сделанным через различные промежутки времени. Оптическое устройство работает по принципу регистрации изменения показателя преломления раствора в месте границы.[ ...]
Перед зарядкой ячейки аппарата Тизелиуса приготовляют 2%-ный раствор полисахарида в боратном буфере с pH 9,6 и диализуют его против примерно 400 мл буферного раствора в течение 16—24 ч.[ ...]
Если при электрофоретическом разделении на диаграмме будет получен один пик, это еще не значит, что исследуемый полисахарид является однородным, так как несколько полисахаридов могут иметь одинаковую подвижность. Смена буфера помогает иногда выявить различия в полисахаридах. Вещество можно считать электрофоретически гомогенным, если для полисахарида наблюдается единственный пик в различных буферных растворах.[ ...]
Гомогенность полисахарида проверяют обратным перемещением границы. Если пик соответствует одному полисахариду, изменение направления тока не вызывает обострения пика на диаграмме, если же пик образован смесью компонентов, изменение направления тока сделает пик на диаграмме более острым.[ ...]
Вернуться к оглавлению