Методика замораживания спермы. Сперму, разбавленную ЛХЦЖ-средой, выдерживают в холодильнике с температурой 0° в течение 2 ч, затем на 30 мии помещают в тающий лед. При этом объем разбавленной спермы в одной колбе не должен превышать 100 мл при высоте слоя спермы 2—2,5 см. После такой выдержки спермы при нулевой температуре пряступают к ее замораживанию с использованием одного или двух хладагентов (твердой двуокиси углерода и жидкого азота). При пользовании двумя хладагентами сперму намораживают в форме гранул по 0,2 мл иа блоке твердой двуокиси углерода (сухого льда).[ ...]
Г ранулы ссыпают в тубу, пользуясь специальной вороикой, туба при этом должна находиться в жидком азоте. После ее наполнения гранулами верхний конец тубы зажимают пинцетом и укладывают в сосуд Дьюара с жидким азотом. Для складывания гранул можно пользоваться и специальными пластмассовыми или алюминиевыми баночками.[ ...]
При пользовании одним хладагентом — жидким азотом — сперму, разбавленную ЛХЦЖ-средой, замораживают в алюминиевых пакетах объемом по 25 мл в холодных парах азота иа расстоянии 1 см от поверхности жидкого азота. Для получения таких условий наливают жидкий азот в специальную морозильную камеру, иа поверхность азота помещают пенопластовый поплавок с металлическим ситом, на сито кладут тубы со спермой и закрывают его крышкой (рис. 72).[ ...]
В качестве морозильной камеры можно использовать двухстенные алюминиевые сосуды с вакуумным межстениым пространством или любой подходящий алюминиевый сосуд, изолированный снаружи пенопластом.[ ...]
Пакеты с семенем в холодных парах азота выдерживают в течение 6—7 мин, а затем опускают в жидкий азот.[ ...]
Хранят замороженную сперму в жидком азоте в сосудах Дьюара различной емкости. Пакеты со спермой можно укладывать как в канистры, так и на дно сосуда. В последнем случае рекомендуется пакет со спермой помещать в марлевый мешочек еще до ее замораживания.[ ...]
Необходимо строго следить за своевременной доливкой азота в сосуды. Хранение спермы в парах азота не допускается.[ ...]
Оттаивание спермы, замороженной в форме гранул, проводят следующим образом. Тубу со спермой вынимают из жидкого азота, быстро пересыпают гранулы в стерильную коническую колбу, добиваясь однослойного расположения гранул на ее дне. Колбу со спермой погружают в воду с температурой 40° н держат до полного оттаивания.[ ...]
При оттаивании спермы, замороженной в пакетах, пакет погружают в воду с такой же температурой (40°) и выдерживают 50 с. Вынутый из воды пакет вытирают чистым полотенцем или марлей, один конец протирают спиртовым тампоном и отрезают ножницами. Оттаянную сперму просматривают под микроскопом для определения ее активности и сразу же используют для осеменения.[ ...]
Доза оттаянной спермы на одно осеменение — 20—25 мл, осеменение кобыл начинают при 3—4-й степени зрелости фолликула и повторяют до наступления овуляции через 24 ч, если оттаянная сперма имела активность не менее 3 баллов. Если же активность оттаянной спермы 2—2,5 балла, то осе-мевение повторяют через 12 ч. Сперму с активностью ниже 2 баллов использовать не рекомендуется.[ ...]
Рисунки к данной главе:
| Схема морозильной камеры |
 |