Снимают фильтр с осадком и переносят его на стеклянную воронку с коротким и широким носиком. Воронку вставляют в ту же коническую колбу, разворачивают фильтр и раскладывают его по краю воронки, прижимая фильтр к стеклу. Из промывалки осадок полностью смывают в коническую колбочку смесью растворов (спирт : эфир = 3:1), используя 20 cмJ экстрагента, перемешивают от руки или стеклянной палочкой, закрывают пробками и оставляют на ночь при комнатной температуре, т.е. около 20°С. После этого надосадочную жидкость методом декантации сливают через стеклянную воронку в колбу Кьельдаля объемом 100 -150 cмJ с широким горлом.[ ...]
Извлечение фосфолипидов повторяют еще дважды с тем же объемом экстрагента, но с разными временными интервалами, затем осадок промывают водой. Все растворы собирают в колбу Кьельдаля. Делают это так: к осадку приливают 20 см’ смеси спирта и эфира.[ ...]
Осадок в третий раз заливают 20 см3 смесью спирт-эфир, перемешивают тщательно, закрывают конические колбы пробками, оставляют на ночь при комнатной температуре. Надосадочную жидкость переносят методом декантации в колбу Кьельдаля.[ ...]
Затем осадок промывают дистиллированной водой. Для этого приливают в коническую колбу 10 см° воды, перемешивают, взбалтывают на ротаторе 5 мин. Осадок сохраняют в колбе, а жидкость переносят в колбу Кьельдаля. Экстракт в колбе Кьельдаля, содержащий спирт, эфир, воду и т.д., перемешивают и упаривают содержимое на водяной бане при t - 80°С (появление первых пузырьков) до объема 5-7 см3 на дне колбы.[ ...]
Упаривание растворов, содержащих спирт и эфир, требует особого внимания и осторожности! Нельзя повышать температуру выше указанной! Нагревание раствора должно быть равномерным. Использовать только колбы Кьельдаля с широким горлом.[ ...]
Содержимое колбы после упаривания охлаждают, доливают 5 cмJ концентрированной серной кислоты, перемешивают, закрывают малой воронкой горло колбы или стеклянным затвором. Раствор озоляют до бесцветного состояния на электроплитке. Для ускорения озоления по стенке в охлажденные до комнатной температуры колбы добавляют по каплям концентрированную хлорную кислоту, но не более 1 см3 в сумме.[ ...]
После окончания озоления содержимое колбы охлаждают, доливают 10 см3 дистиллированной воды, перемешивают, добавляют 50 cмJ горячей воды. Раствор количественно переносят в мерную колбу на 100 см Колбу Кьельдаля споласкивают малыми порциями горячей воды, эти воды собирают в мерную колбу, доводят содержимое до метки, перемешивают. Это раствор В, который используют для колориметрического определения Р-липидов.[ ...]
Вернуться к оглавлению