Метод пригоден для анализа растительных эмбриональных тканей, бактериальной массы, нуклеопротеидов. Вещества, содержащие пуриновые основания, подвергаются гидролизу, свободные пурины осаждаются закисью меди. После сжигания осадка закиси меди определяют азот по микрокьельдалю.[ ...]
Горячий гидролизат осторожно нейтрализуют 40%-м раствором ЫаОН до pH 4,5 - 4,7 для максимального осаждения белков. Холодный раствор фильтруют в мерную колбочку на 15 - 25 см"1.[ ...]
Осадок на фильтре промывают 1,5 см3 нитратного буфера с pH 5,0, затем водой доводят объем колбы до 2/3.[ ...]
В фильтрат в мерной колбочке по каплям добавляют 20 - 25%-й водный раствор танина («х.ч.» без азота). Для полного осаждения белков и полипептидов необходимо внести 6-12 капель, тщательно их перемешивая, затем довести до метки водой.[ ...]
После добавления танина раствор фильтруют через сухой фильтр или центрифугируют для отделения белков.[ ...]
Берут 5 см"1 прозрачного фильтрата, добавляют 3 см3 цитратного буфера pH 5 Буфером доводят смесь точно до pH 5, так как пурины количественно осаждаются из раствора только при этом значении pH.[ ...]
После добавления буфера пурин из раствора осаждаем, добавляя для этого 0,3 - 0,8 см3 10%-й суспензии закиси меди.[ ...]
Осадок пуринов отделяют от раствора центрифугированием, затем промывают его 2-3 раза водой, Количественно переносят осадок в колбу Къельдаля, сжигают, добавляя 3-5 см3 концентрированной серной кислоты и проводят микроопределение азота колориметрически или микроотгонкой.[ ...]
Если необходимо вычислить содержание нуклеиновых кислот по азоту пуриновых оснований, то величину азота пуринов умножают на 9,12 (эта величина 100: на среднее содержание азота пуринов в нуклеиновых кислотах).[ ...]
Вернуться к оглавлению