Биотест с отрезками колеоптилей пшеницы также хорошо разработан и основан на растяжении определенной зоны колеоптиля под действием того или иного вещества по сравнению с контролем, который принимается за 100%. Разработан тест для определения ауксинов и ингибиторов; среди последних и фенольные вещества, которые в живом растении чаще всего подавляют рост, а в больших концентрациях (например, сточных водах целлюлозно-бумажных комбинатов) являются токсическими веществами, вызывающими загрязнение питьевых вод. Примером этого может служить загрязнение вод Ладожского озера и реки НевЫ.[ ...]
Нормальный рост колеоптилей осуществляется на 2%-ном растворе сахарозы в дистиллированной воде, в котором и растворяют то или иное токсическое вещество. Нами этот метод испытан на различных веществах и вытяжках и показал хорошие результаты ингибирования (на 20-40% и более). Применение метода дает возможность показать, что действие многих токсикантов двояко: в очень малых концентрациях они стимулируют рост, а в больших - ингибируют. Так, широко известный гербицид 2,4Д в концентрации ниже миллионных долей (108-10 9%) проявляет стимулирующий эффект, а уже в концентрациях 10 °—10 7% - ингибирующий.[ ...]
Помимо колеоптилей пшеницы можно использовать и гипокотили хвойных древесных пород, которые для научных целей также испытаны нами с соавторами (Физиолого-биохимические методы... 1977).[ ...]
При индивидуальной работе можно использовать для нарезки отрезков колеоптилей специальный станочек, в котором выточены бороздки для укладывания ростков. Уложенные ростки зажимают с двух сторон резинками. Затем в поперечные бороздки, сделанные через 5 мм, вставляют бритву и нарезают очень быстро 10-12 штук отрезков колеоптилей. При нарезке можно использовать специальный резачок. При отсутствии резачка используют миллиметровку, покрытую стеклышком, и бритву.[ ...]
До проведения практического занятия подготавливают ростки пшеницы. Для этого хорошо всхожие семена замачивают на 18-20 часов в воде, а на другой день раскладывают пинцетом в кюветы зародышем вверх и в одном направлении на слой мокрой ваты (2-3 см), на которую помещают два слоя фильтровальной бумаги. Вату увлажняют до полной влагоемкости, что легко регулировать, сливая осторожно излишки воды через край кюветы. Кювету закрывают пленкой, подгибая ее края под дно кюветы, а затем ставят в термостат при температуре 25-27°С зародышами на север, что обеспечивает более ровное прорастание.[ ...]
Проростки проращиваются до среднего размера 1,5-2,5 см (не более), т. к. большие проростки теряют чувствительность. Для установления нужного времени замачивания и проращивания предварительно проводят пробные работы, т. к. на эти процессы влияют многие переменные: сорт пшеницы, всхожесть, размеры семян и время года. Наш многолетний опыт показал, что в процессе прорастания семян существует определенная периодичность, обусловленная генетически и внешние факторы играют здесь второстепенную роль. Так, семена почти всех растений, не требующих стратификации, дружно и быстро прорастают в весенний период, хуже - в осенний и очень плохо - в период глубокого покоя (с половины ноября до половины января).[ ...]
Из исходного раствора гербицидов или других испытуемых веществ приготавливают серию растворов на 2%-ной сахарозе методом последовательного разбавления. Последний из растворов должен быть ниже ПДК (для гербицидов меньше 10е%). Сделать вытяжку из почвы: 10 г растертой почвы заливают 25 мл дистиллированной воды, сильно взбалтывают 10-15 мин, отстаивают, фильтруют через воронку. Можно также взять для биотестирования воду реки, водохранилища.[ ...]
Ростки пшеницы срезают у основания бритвой или пинцетом с заточенными кончиками, складывают в чашку Петри. Используя миллиметровку и предметное стекло, разделяют колеоптили на фракции: 1,5-2 мм, 2-2,5 мм и работают на преобладающей фракции. Затем от колеоптиля бритвой отсекают кончик 0,5 мм, вырезают следующие 5 мм - зону растяжения, и помещают на 10-15 мин в чашку Петри с дистиллированной водой для удаления ауксинов и лучшей реакции на испытуемое вещество. Через указанное время вырезанные зоны колеоптилей помещают (по 10 шт.) в пенициллиновые бутылочки с испытуемым раствором, которые закрывают резиновыми пробками. Повторность опытов - трехкратная. Пенициллиновые бутылочки осторожношоворачивают набок, отрезки колеоптилей расправляют так, чтобы они все плавали в растворе. В таком состояний их помещают в термостат при температуре +25°С - +26°С на 2-3 дня (в учебных целях - на неделю).[ ...]
Через указанные сроки снимают результаты измерения длины отрезков колеоптилей. Рост их на чистой 2%-ной сахарозе принимается за контроль (100%), реакция же на испытуемые растворы подсчитывается относительно контроля.[ ...]
Строится гистограмма ингибирования (а в отдельных случаях и стимулирования) роста отдельными токсическими веществами или их смесями (вытяжка из почвь1, вода) в разных разведениях.[ ...]
Вернуться к оглавлению