Известно, что в ответ на попадание в живой организм чужеродных веществ (ими могут быть и суперэкотоксиканты) в нем вырабатываются антитела, как отклик иммунной системы организма. Последние в высшей степени специфично взаимодействуют с этими веществами с образованием соответствуюецих комплексов, что в итоге приводит к их “нейтрализации” и выводу из организма Именно на использовании данных взаимодействий и возможности получения необходимых антител и базируются иммунохимические методы анализа. Стремление создать специфичные и эффективные методы определения в воде, воздухе и почве остаточных количеств токсичных веществ и снизить их стоимость во многом явилось стимулом к разработке указанных методов. Многие иммунохимические методы имеют высокую чувствительность и специфичность, а в ряде случаев позволяют определять высокотоксичные соединения даже без выделения из матрицы или после минимальной очистки.[ ...]
Видно, что при фиксированной концентрации антитела равновесное отношение концентраций связанного и свободного антигена зависит от его общей концентрации. Этот вывод лежит в основе всех иммунохими-ческих методов. По существу антитела выступают в роли реагентов биологического происхождения, которые с высокой специфичностью способны “узнавать” чужеродные вещества. Обычно они представляют собой иммуноглобулины - белки сыворотки крови, которые образуются в ответ на введение иммуногена. Однако многие низкомолекулярные соединения, в том числе и пестициды, сами по себе не стимулируют образование антител, т е. не являются иммуногенами. Индуцировать их образование можно лишь после связывания этих веществ с белком-носителем, в качестве которого, как правило, применяют бычий альбумин. Следует заметить, что в реакции с белком-носителем не должны затрагиваться те группировки молекул антигена, которые участвуют в образовании комплексов антиген-антитело и которые, следовательно, необходимы для индуцирования образования в организме животного специфических антител.[ ...]
Для аналогичных целей предлагается маркирование путем введения электрохимически активных группировок, которые легко могут быть определены электрохимическими методами [4 . Достаточно хорошо этот способ иллюстрируют примеры, описанные в работе [106]. При этом в качестве метки служат ионы металлов, образующие комплексные соединения с хелатообразующими реагентами, “пришитыми” к протеинам. В результате взаимодействия с определяемым компонентом ионы металлов высвобождаются и определяются методом инверсионной вольтамперо-метрии. Одновременно можно определять несколько компонентов, используя в качестве меток разные ионы. При проведении анализа в капиллярных трубках (объем 70 пл) предел обнаружения достигает 4,6 1020 моль. Градуировочный график линеен в пределах четырех порядков.[ ...]
Использование неподвижной фазы существенно упрощает анализ, поскольку разделение фаз происходит без каких-либо затруднений Приборное оформление метода также не требует больших затрат Однако из-за неполной адсорбции ферментсодержащих препаратов они расходуются нерационально. Другой недостаток метода в том, что ферментсодержащие и анализируемые компоненты выдерживают некоторое время (инкубируют) вместе. Это может привести к инактивации фермента.[ ...]
Результаты применения иммунохимических методов анализа в определении следовых количеств токсикантов показывают, что эти методы более производительны, нежели инструментальные, порой в 10 и более раз. Стоимость оборудования и реактивов, особенно для ИФА, также значительно ниже В настоящее время выпускаются наборы реагентов для определения наиболее часто встречающихся загрязнителей. Предложены варианты анализа, в которых реагенты закреплены на полосках бумаги [2 В табл. 7.12 приведены примеры использования иммунохимических методов для определения некоторых пестицидов.[ ...]
Кроме гетерогенного варианта ИФА применяют и другой, основанный на различиях в каталитических свойствах ферментов в свободном виде и в связанном. Его реализуют в гомогенных условиях, т е. без отделения комплексов АГ-АТ. Отсутствие этой стадии существенно сокращает время проведения анализа (до нескольких минут). Данное обстоятельство стимулировало разработку автоматизированных систем для иммунохимического определения различных биологически активных веществ, в том числе и токсикантов. В таких устройствах применяют либо визуальное наблюдение за изменением окраски раствора, либо спектрофотометрическое детектирование.[ ...]
В некоторых случаях появление фермента в растворе является следствием специфического взаимодействия АГ-АТ. Для этого фермент заключают внутрь липосом, к поверхности которых химически присоединен антиген Добавление антитела приводит к образованию комплексов АГ-АТ на липосоме и ее лизису, который сопровождается переходом фермента в раствор. Активность фермента служит мерой концентрации антигена 4 Время анализа около 15 мин, нижняя граница определяемых концентраций 109 моль/л. Кроме ферментов в липосомы могут быть включены и другие маркеры.[ ...]
Вернуться к оглавлению