Для эффективного хроматографического разделения определяемых компонентов наиболее часто применяют колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 4-5 мм, заполненные сферическими частицами силикагеля размером от 5 до 10 мкм с привитыми октадецильными группами 54] Появление в последние годы колонок меньшего диаметра, заполненных более мелкими частицами силикагеля, привело к уменьшению расхода растворителей и продолжительности анализа, увеличению эффективности разделения. К идеальному варианту приближаются колонки с внутренним диаметром 1-2 мм, позволяющие разделять 100 пг пробы, содержащейся в 1 мкл раствора (т е. при концентрации 0,1 мкг/г), на неподвижной фазе с диаметром частиц 10 мкм.[ ...]
Следует заметить, что колонки для ВЭЖХ довольно дорогие. По этой причине их защищают от загрязнения, снабжая предохранительным картриджем (предколонкой) Очень сложные смеси лучше предварительно разделять другими методами, а при переходе от одного растворителя к другому следует избегать резких скачков их полярности. Растворы проб и растворители перед вводом в колонку необходимо фильтровать.[ ...]
В качестве промежуточного варианта используют неподвижные фазы с привитыми аминньгми, нитрильньгми и другими функциональными группами. Последние фиксируют на поверхности силикагеля с помощью углеводородньгх цепочек из 10-11 метиленовых звеньев. Меняя функциональную группу, таким фазам можно придать ионообменные или комплексообразующие свойства либо свойства хиральных лигандов, что позволяет разделять энантиомеры.[ ...]
Выбор подвижной фазы, как правило, основывается на эмпирическом подборе индивидуальных растворителей или их смесей, имеющих необходимую элюирующую способность. Последнюю выражают способностью растворителя взаимодействовать с адсорбентом. В случае полярных фаз относительная активность растворителей, как правило, сохраняется при переходе от одного адсорбента к другому, что позволяет расположить их в элюотропный ряд (табл. 7.9). Для сорбентов с обращенной фазой эта последовательность обратная. Параметр г,0 определяет скорость перемещения хроматографических зон, поэтому, выбрав соответствующие растворители, можно регулировать время удерживания разделяемых веществ в колонке. Значения га исключительно полезны при применении смешанных растворителей. Варьируя их состав, можно повлиять на селективность процесса и добиться лучшего разрешения пиков. В частности, в ВЭЖХ с обращенно-фазовыми сорбентами повышение содержания воды в смеси с ацетонитрилом или метанолом приводит к увеличению времени удерживания анализируемых компонентов, поскольку чистая вода соответствует максимальному удерживанию неполярных органических соединений. В этом случае элюирующая способность возрастает по мере увеличения доли менее полярного растворителя.[ ...]
Традиционный УФ-детектор с перестраиваемой длиной волны для ВЭЖХ по существу представляет собой высокочувствительный УФ-спек-трометр с проточной микроячейкой, который регистрирует оптическую плотность раствора при данной длине волны В большинстве детекторов часть излучения направляется на второй фотодиод, расположенный в канале сравнения, для компенсации флуктуаций в работе лампы. Для повышения чувствительности измерений монохроматор можно запрограммировать на автоматическое изменение длины волны в ходе анализа Однако во всех случаях в данный момент времени измерение поглощения осуществляется только в одной точке спектра. На практике часто бывает необходимо проводить измерения на различных длинах волн одновременно, когда определяемые соединения плохо разделяются хроматографически Высокочувствительная запись спектров стала реальностью с появлением детекторов на диодной матрице В таких детекторах матрица фотодиодов (более двухсот) постоянно регистрирует сигналы в ультрафиолетовой и видимой частях спектра (УФ-В-детекторы), обеспечивая запись в режиме сканирования. Данные, полученные одновременно на различных длинах волн, обрабатываются с помощью компьютеров, которые выделяют сигнал на оптимальной длине волны, вычитают фон и осуществляют другие операции. Применение детекторов на диодной матрице обеспечивает получение аналитических данных с гораздо большей степенью достоверности.[ ...]
В частности, с появлением УФ-В-детектора на диодной матрице ВЭЖХ стала стандартным методом контроля качества природной и питьевой воды на содержание пестицидов [34,56,57]. Известно, что многие из них термически нестабильны, например производные феноксиуксус-ных кислот. Анализируемые вещества извлекают из воды с помощью жидкостной или твердофазной экстракции.[ ...]
На рис 7.2 приведена схема проведения анализа при определении 16 приоритетных ПАУ в воде методом ВЭЖХ с флуоресцентным детектором [341. Методика основана на экстракции определяемых веществ ди-хлорметаном и очистке загрязненных проб на колонке с силикагелем.[ ...]
Заметим, что при выпаривании экстракта следует соблюдать осторожность, поскольку могут возникнуть потери легких ПАУ. Обычно эффективность экстракции выше 90%. В случае “грязных” проб, требующих хроматографической очистки, необходимо оценивать потери ПАУ на этой стадии путем введения в матрицу эталонов. При определении высоких концентраций ПАУ рекомендуется растворять пробу не в 200 мкл, а в 1-5 мл подвижной фазы.[ ...]
Аналогичные главы в дргуих документах:
| См. далее:Высокоэффективная жидкостная хроматография |
| См. далее:Высокоэффективная жидкостная хроматография |
| См. далее:Высокоэффективная жидкостная хроматография |